[目的]　　 1.研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)对尼古丁诱导的肺癌细胞上皮-间质转化和肿瘤血管生成的影响。　　 2.初步探讨EGCG发挥作用的分子机制，寻找EGCG防治肺癌的潜在分子靶点。　　 [方法]　　 分别用EGCG(10μmol/L、25μ mol/L、50μ mol/L、100μ mol/L)处理尼古丁诱导的A549肺癌细胞。细胞创伤愈合法和Transwell小室法观察EGCG对尼古丁诱导的A549细胞迁移、侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测β-catenin、Vimentin、HIF-1α、P53、COX-2、p-Akt和p-ERK的蛋白表达变化;收集各处理组的条件培养液，用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)检测上清液中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)的蛋白浓度;实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、P53、COX-2的mRNA表达变化。　　 体外血管生成分析:用ECM625 Matrigel作为基质检测EGCG对尼古丁诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)微管形成的影响。同时将非特异性sh-RNA(NS sh-RNA)和特异性HIF-1αsh-RNA转染A549肺癌细胞，检测尼古丁诱导的HUVECs微管形成是否具HIF-1α依赖性。　　 体内血管生成分析:分别收集各种处理的A549肺癌细胞及其条件培养液，与BD Matrigel Matrix混合后注射入裸鼠腋侧皮下，分析EGCG对尼古丁诱导的肺癌体内血管生成的影响以及尼古丁诱导的肺癌体内血管生成是否具有HIF-1α依赖性。　　 [结果]　　 1.细胞创伤愈合实验和Transwell小室实验: EGCG抑制尼古丁诱导的A549细胞迁移、侵袭能力。　　 2.Western blotting结果显示:EGCG抑制了尼古丁诱导的Vimentin、HIF-1α、 COX-2蛋白的过表达;上调了P53和β-catenin蛋白的表达。尼古丁使A549肺癌细胞中Akt和ERK的磷酸化水平增强;用EGCG处理后，随着EGCG浓度增加，p-Akt、 p-ERK的蛋白表达水平逐渐降低。这些结果说明，EGCG可抑制尼古丁诱导的Akt、 ERK1/2的激活。　　 3.ELISA结果显示:EGCG抑制了尼古丁诱导的VEGF蛋白分泌，并具有浓度依赖性。　　 4.实时定量PCR结果显示:尼古丁诱导的A549细胞中HIF-1α、VEGF和COX-2的mRNA表达升高;使P53 mRNA表达降低;而EGCG对尼古丁诱导的A549细胞中HIF-1α、P53、VEGF和COX-2的mRNA表达无明显影响。　　 5.体外血管生成实验结果显示:尼古丁诱导HUVEC微管形成;EGCG或转染HIF-1α sh-RNA质粒可明显抑制尼古丁诱导的HUVEC微管形成;但转染非特异性sh-RNA(NS sh-RNA)质粒对尼古丁诱导的HUVEC微管形成无明显影响，说明EGCG抑制尼古丁诱导的HUVEC微管形成，且尼古丁诱导的肺癌体外血管生成可能具有HIF-1α依赖性。　　 6.体内血管生成实验结果显示:尼古丁可诱导肺癌体内血管生成，EGCG可抑制尼古丁诱导的肺癌体内血管生成，且尼古丁诱导的肺癌体内血管生成可能具有HIF-1α依赖性。　　 [结论]　　 EGCG可抑制尼古丁诱导的A549肺癌细胞迁移、侵袭和体内外血管生成，其机制可能与抑制HIF-1α和Vimentin、COX-2蛋白表达、VEGF蛋白分泌、Akt和ERK激活，上调β-catenin、P53蛋白表达有关，说明EGCG可能是一种防治肺癌的潜在药物。