背景超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gatedcation channels 4,HCN4)主要在心脏窦房结表达,与心脏起搏电流的产生有着密切关系,因此HCN4基因又被称为心脏的起搏基因,HCN4基因突变会导致窦房结的功能障碍和心脏传导系统的功能发育的异常。出生后HCN4是否在心脏成纤维细胞、心肌细胞和内皮细胞表达,以及细胞水平和组织水平是否存在表达差异,目前报道较少。本研究试图从细胞和组织水平研究HCN4在成纤维细胞,心肌细胞和内皮细胞的表达的规律。目的检测HCN4在心肌成纤维细胞、心肌细胞和人脐静脉内皮细胞中表达分布,在体外成纤维细胞中的表达规律,以及在新生、成年和老年SD大鼠的增龄变化。方法SD雄性大鼠共39只,分为新生组(1~3天),成年组(2月龄)和老年期(18月龄),每组各8只,取新鲜心脏,其中4只用于冰冻切片,剩余4只用于PCR;另15只新生SD大鼠心脏,用0.2%胰蛋白酶和0.1%II型胶原酶消化法,获得原代心肌成纤维细胞,原代心肌细胞;用细胞免疫荧光、细胞免疫组化检测人脐静脉内皮细胞、原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞HCN4的表达;用组织免疫荧光、组织免疫组化检测新生、成年和老年SD大鼠心脏中的内皮细胞、成纤维细胞和心肌细胞HCN4的表达;Western blotting技术、实时荧光定量聚合酶链法检测原代心肌成纤维细胞HCN4的表达,用实时荧光定量聚合酶链法检测HCN4在不同月龄的SD大鼠心脏中的表达情况。结果体外细胞培养显示,人脐静脉内皮细胞、成纤维细胞和原代心肌细胞中均有HCN4的表达。心肌组织切片显示,新生、成年和老年SD大鼠心脏中的成纤维细胞和心肌细胞中均有HCN4的表达,内皮细胞表达不明显。P1-P4代成纤维细胞的Western blotting和PCR结果显示HCN4随着成纤维细胞代次增加表达量逐渐降低,不同月龄大鼠左心室的PCR结果显示随着大鼠月龄的增加HCN4的表达量逐渐降低,其结果与培养的细胞表达结果一致。结论HCN4随月龄和细胞代次的增加其表达量逐渐下降,HCN4以成纤维细胞和部分心肌细胞表达为主,内皮细胞表达不均。