【摘 要】
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近年来,组织透明化技术发展非常迅速,特别是新近发明的CLARITY技术,因为可以创新性的将一块完整组织转变成一种光学上透明且生物大分子可渗透的水凝胶组织复合物而倍受人们关
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近年来,组织透明化技术发展非常迅速,特别是新近发明的CLARITY技术,因为可以创新性的将一块完整组织转变成一种光学上透明且生物大分子可渗透的水凝胶组织复合物而倍受人们关注。然而对该复合体的免疫荧光标记过程实在太过缓慢,极大的限制了该技术的进一步运用和推广。本文设计了一个的实验体系,系统测量了不同大小的抗体分子在该胶体复合物中的扩散系数。根据测得的扩散系数,我们发现抗体分子在该复合物中的扩散速率与自由扩散的速率在同一量级。因而本文认为原始的CLARITY方法选择的凝胶配方已经接近最优,难以通过增加凝胶孔径来达到快速抗体渗透和标记的目的。为此,本文认为最好的解决方案是给予生物大分子一个外力来加快它们在组织凝胶复合物中运动。基于这一目的,并考虑到抗体分子在合适的条件下会带电荷的事实,我们在原来设计的扩散测试系统中加入一个电场,并用该电场去驱动抗体分子快速进入生物组织凝胶复合体。实验结果表明将Ig G抗体扩散至相同的深度,加电场的条件下要比不加电场的条件下,扩散时间减少了800多倍,因此多轮免疫染色有可能从数月的时间缩短到一天之内完成为了进一步确认该方法在实际运用中的可行性,本文尝试了用电场驱动方式免疫标记透明化后的转基因老鼠样品。免疫荧光标记信号与内源信号充分重合。尤为重要的是,没有观察到明显的样品在电场条件下被破坏的情况发生,证明了该方法在方法在组织透明化样品快速免疫方面的可靠性。该方法的实现,也使得CLARITY等组织透明化技术应用于更广范围和更大尺度组织三维结构的研究成为可能。
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