目的:胰腺癌(PC)是最致命的恶性肿瘤之一,主要归因于其局部侵袭能力较强,以及高远处转移率和化疗耐药性。丝氨酸/精氨酸蛋白激酶2(SRPK2)能够磷酸化含丝氨酸/精氨酸(SR)结构域的蛋白并调节SR蛋白的剪接活性,其在多种人类肿瘤中表达上调,包括白血病、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠癌和前列腺癌。然而,SRPK2在PC中的重要作用,尚无研究对此作出评价。Numb蛋白,一种细胞命运决定子,能够调节抑癌基因p53的活性。在肝细胞癌(HCC)中,SRPK2敲除上调Numb蛋白的表达,并且抑制肝癌细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力。在PC中,Numb能够减弱p53的泛素化降解,并且降低PC细胞的化疗药物敏感性。因此,我们研究SRPK2在PC组织中的表达以及与临床病理参数和预后的关系,并进一步研究SRPK2、Numb和p53在PC组织和细胞中表达的相关性以及对PC细胞侵袭、迁移和耐药性的影响。研究方法:1、组织水平:通过免疫组化(IHC)、免疫印迹(WB)和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PC组织中SRPK2的表达水平。通过IHC检测SRPK2、Numb和p53蛋白在PC组织中表达的相关性,以及与临床病理学参数和PC患者预后的关系。2、细胞水平:通过免疫共沉淀(Co-IP)检测SRPK2、Numb和p53蛋白在PC细胞内的内源性结合。通过构建SRPK2沉默和过表达的稳转细胞系以及siRNA转染,研究PC细胞中SRPK2、Numb和p53蛋白的相关性。通过细胞迁移和侵袭实验以及CCK8实验,检测SRPK2、Numb和p53蛋白对PC细胞侵袭、迁移和耐药性的影响。结果:1、SRPK2在PC组织中的差异表达及其与PC患者临床病理学参数和术后生存的相关性分析:SRPK2在73例PC组织中的表达显著高于配对的癌旁组织,Kaplan-Meier分析显示SRPK2阳性表达的PC患者术后生存时间显着低于SRPK2阴性表达患者,并且Cox多因素分析显示SRPK2表达是独立的预后危险因素。SRPK2表达与肿瘤T分期和国际抗癌联盟(UICC)分期正相关,与患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、患者术前CA19-9水平和术后肝转移无相关性。Spearman相关性分析显示,在40例PC组织连续切片中,SRPK2与Numb表达负相关,但与突变型p53(mtp53)表达无相关性。2、SRPK2、Numb和p53在PC细胞中表达的相关性:成功构建SRPK2沉默和过表达的野生型p53(wtp53)PC稳转细胞系。SRPK2蛋白表达在sg-SRPK2组显著低于scrambled组,反之,SRPK2蛋白表达在SRPK2-GFP组显著高于GFP组。在没有奥沙利铂干预的情况下,沉默或过表达SRPK2并不改变wtp53蛋白表达水平。然而,预先使用奥沙利铂干预,p53和p21蛋白表达同时被激活,并且在sg-SRPK2组的表达显著高于scrambled组,反之在SRPK2-GFP组的表达显著低于GFP组。此外,不论是否使用奥沙利铂处理细胞,Numb蛋白表达水平在sg-SRPK2组显著高于scrambled组,反之在SRPK2-GFP组显著低于GFP组。我们通过Co-IP实验进一步发现,不论是否使用奥沙利铂干预,SRPK2、Numb和p53蛋白能够在PC细胞内形成免疫三重复合物。3、SRPK2调节PC细胞的迁移和侵袭能力以及化疗药物敏感性:细胞迁移和侵袭实验结果显示,与对照组相比,SRPK2沉默降低了PC细胞的迁移和侵袭能力;反之,SRPK2过表达增加了PC细胞的迁移和侵袭能力。CCK8结果显示,SRPK2沉默增加PC细胞对吉西他滨和奥沙利铂的药物敏感性;反之,SRPK2过表达降低PC细胞对吉西他滨和奥沙利铂的药物敏感性。4、p53敲除逆转了奥沙利铂干预下由SRPK2沉默诱导的wtp53蛋白表达增加、细胞迁移和侵袭能力的降低以及化疗药物敏感性增加:在奥沙利铂干预的PC细胞中,Numb敲除显着逆转了SRPK2沉默诱导的wtp53蛋白水平表达增加。当使用p53 siRNA代替Numb siRNA时,这种趋势更加明显。然而,Numb或p53敲除并不改变SRPK2蛋白表达水平。此外,p53敲除逆转了PC细胞中由SRPK2沉默诱导的细胞迁移和侵袭能力降低以及化疗药物敏感性增加。结论:SRPK2促进了PC的进展,并在化疗药物干预下,通过下调Numb蛋白的表达,负向调节wtp53蛋白的表达。因此,SRPK2以p53依赖性方式促进PC的侵袭、迁移能力以及对吉西他滨和奥沙利铂的耐药性。未来我们将进一步研究SRPK2、Numb和p53之间相互作用的分子机制,并通过体内动物实验进一步验证SRPK2、Numb和p53对肿瘤发生和发展的影响。