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目的：恶性肿瘤的发生、发展除与肿瘤细胞无限制增殖外，还与机体抗肿瘤免疫功能受损有关，已经证明多种细胞因子在其中发挥重要作用。白介素-12（interleukin-12,IL-12）是细胞免疫调节中非常关键的细胞因子，其生物功能包括：刺激T细胞和NK细胞分泌干扰素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)；促进CD4+T细胞向Th1细胞分化；增强NK细胞和CD8+T细胞的杀伤功能以及抑制肿瘤血管生成等功能。IFN-γ是典型的Th1型细胞因子，能抑制肿瘤细胞株的生长，具有巨噬细胞激活因子的作用，能引发巨噬细胞的杀瘤效应，增强细胞毒T淋巴细胞（CTL）和NK细胞杀伤靶细胞的能力，并可抑制Th2细胞增殖。免疫应答的产生首先由抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC)摄取抗原，经其加工、处理后将信息传递给淋巴细胞，引发一系列特异性免疫应答。APC是机体免疫应答的首要环节，有效的抗原提呈是免疫激活的关键。树突状细胞（dendritic cells,DC）是目前为止发现的功能最强的APC，是唯一能激活初始型T细胞（naive T cells）的专职APC。近来研究发现肿瘤的免疫逃逸与荷瘤宿主的DC功能缺陷关系密切。肿瘤细胞可通过抑制DC的分化，干扰DC活化并促其凋亡而逃脱机体免疫监控。其结果是DC不能有效递呈肿瘤抗原，因而不能激发机体对肿瘤细胞的有效的免疫应答。DC可由造血干细胞（CD34+）及外周血单核细胞（CD14+）分化产生，近年来发现白血病细胞尤其是慢性粒细胞白血病（CML）细胞可在体外诱导分化为DC。本研究通过检测急性白血病患者血清IL-12和IFN-γ的水平，以探讨急性白血病患者的免疫状态。并将外周血单核细胞、人CML细胞以及K-562细胞体外诱导为DC，并进行混合淋巴细胞反应及细胞毒实验，以探讨不同来源的DC免疫功能的差异，为DC用于白血病的免疫治疗进行初步研究。方法：1. 急性白血病血清IL-12，IFN-γ的水平：初治急性白血<WP=5>病患者42例，男性26例，女性16例，年龄15~74岁（平均35.19±19.60）。其中急性髓性白血病（AML）30例；急性淋巴细胞性白血病（ALL）12例。AML除M3外采用标准DA方案（M3采用维甲酸+化疗），ALL采用标准VDCP方案治疗。分别于治疗前和诱导化疗后无菌采集血清，并取正常健康血清标本20例，男11例，女9例，年龄22~65岁，为正常对照。白血病组和正常对照组年龄和性别分布无显著性差异。应用酶联免疫法（ELISA）测定血清中IL-12和IFN-γ的水平。2. DC的体外诱导：采用Ficol淋巴细胞分离液分离5例正常人和5例初诊CML患者外周血单个核细胞(PBMNC)。正常组先孵育2 h，洗出悬浮细胞，与CML组PBMNC、K-562细胞株分别以5×105/ml的密度分别接种于24孔培养板，每孔2.0ml，培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中，加入终浓度为50ng/ml 的IL-4和100ng/ml GM-CSF，于37oC，体积分数为5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每2~3天半量换液并半量补充细胞因子。取生长良好的K-562细胞107个，用生理盐水洗涤2遍，加入培养基2.0ml，分别在室温和-20 oC反复冻融5次，作为白血病相关抗原，于培养第7天，将正常组分为2组，一组加入K-562的冻融抗原50μl（负载组），一组加入50μl培养基（未负载组）。在倒置显微镜下观察细胞生长的动态变化；于培养7、14、21天分离DC，采用直接免疫荧光标记、流式细胞仪检测细胞CD1a、CD54、CD80、CD83的表达，应用ELISA法测定上清中IL-12水平，应用RT-PCR方法检测DC的IL-12mRNA表达。3. 同种异体混合淋巴细胞反应（allo-MLR）：细胞培养方法同前，取培养10天的不同来源的DC以25mg/L丝裂霉素去增殖后作为刺激细胞。分离健康人PBMNC，贴壁2h去除贴壁细胞，作为效应细胞。将刺激细胞和效应细胞按1:2, 1:10,1:50比例加入96孔板（总体积200μl/孔）培养72h，以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法测定增殖能力。4．DC诱导特异性CTL反应以及分泌IL-12和促进T细胞分泌IFN-γ的作用：取培养10天的正常DC、CML-DC和K-562DC以丝<WP=6>裂霉素去增殖后作为刺激细胞。以去除贴壁细胞的正常人PBMNC作为效应细胞，以按1:10比例培养72h。收集细胞作为CTL，上清应用ELISA法测定IL-12和IFN-γ的水平。以K-562细胞和自身CML细胞作为靶细胞。将CTL与靶细胞以20:1混合，37oC、5%CO2饱和湿度培养16h，应用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和MTT法测定对靶细胞的杀伤作用。结果：1.急性白血病血清IL-12，IFN-γ的水平：采用ELISA方法检测急性白血病患者血清IL-12，IFN-γ的水平显示，初治急性白血病患者血清IL-12、IFN-γ水平（分别为19.21±17.04 ng/L和21.06±13.96ng/L）明显低于正常对照组（分别为39.95±26.73 ng/L和42.51±24.06 ng/L）（均P〈0.01〉）；经化疗达CR后血清IL-12、IFN-γ水平明显升高（分别为34.26±19.49 ng/L和37.20±20.59ng/L）与正常对照组无显著性差异（P>0.05）；不同性别之间血清IL-12、IFN-γ水平（男性分别为18.29±16.16 ng/L和19.29±12.03ng/L，女性分别为20.70±18.84 ng/L和 23.93±16.65ng/L）均无显著性差异（P>0.05）；不同分型之间血清IL-12、IFN-γ水平（ALL分别为23.22±17.69 ng/L 和17.91±11.16ng/L，AML 分别为17.60±16.81ng/L和22.32±14.92ng/L）比?