论文部分内容阅读
目的:观察中药复方柴贝片对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠的甲状腺自身抗体(TGAb、TPOAb)、甲状腺病理形态学及对细胞凋亡蛋白Fas、FasL表达的影响,研究其治疗自身免疫性甲状腺炎药效学作用,并从细胞凋亡角度探讨柴贝片的作用机制。材料与方法:于北京购买健康的雌性SD大鼠78只,体重约160士210g,运送进辽宁中医药大学附属医院实验中心动物室进行适应性饲养1周后随机分为6组:正常组12只;模型组14只;雷公藤组14只;柴贝片低剂量组12只;柴贝片中剂量组12只;柴贝片高剂量组14只。正常组给予普通饲料喂养,剩余6组造模:将猪甲状腺球蛋白(PTg)3Omg完全溶解于PBS溶液60ml中,取15ml与等体积的弗氏完全佐剂(CFA)充分混合成油包水状,取0.2ml在腹腔、腿、等部位进行多点皮下注射作为初次免疫,一周内注射2次;第2周取PTg15ml与等体积的弗氏不完全佐剂(IFA)充分混合后进行皮下注射作为加强免疫,以后每周注射1次,至第7周,进行免疫注射期间,为配合实验,给予各组大鼠饮用高碘水(1L水中加入0.64g碘化钠配制)喂养;第8周开始,正常组仍给予普通饲料及饮水饲养,雷公藤组给予雷公藤多苷片15mg/kg/d灌胃,柴贝片组分别给予柴贝片供试品6mg/kg/d、20mg/kg/d、60mg/kg/d,连续4周。第13周将大鼠处死,取血并取出甲状腺组织,做HE染色光镜下观察:TPOAb、TGAb、FT3、FT4、TSH等检测指标按照相应试剂盒要求进行检测,甲状腺凋亡蛋白Fas和FasL表达采用免疫组化法检测。结果:1.模型组血清TGAb较正常组升高,具有显著性差异(P<0.05);模型组血清TPOAb较正常组升高,具有显著性差异(P<0.01);雷公藤组血清TGAb和TPOAb较模型组降低,均具有显著差异(P<O.05);柴贝片各组血清TGAb和TPOAb较模型组降低,均具有显著差异(P<O.05);雷公藤组与柴贝片各组比较血清TPOAb水平,柴贝片高、低剂量组与雷公藤组有显著差异(P<O.05),柴贝片中剂量组无显著差异(P>O.05);雷公藤组与柴贝片各组比较血清TGAb水平,无显著差异(P>O.05)。2.病理检查结果示模型组淋巴细胞浸润程度较正常组明显增多;雷公藤组和柴贝片治疗组淋巴细胞浸润程度较模型组明显减轻;雷公藤组与柴贝片组比较淋巴细胞浸润程度,柴贝片组更低。3.免疫组化法染色观察正常组甲状腺上皮细胞Fas、FasL免疫阳性物呈浅棕色,在甲状腺上皮细胞表达少,范围小,颜色浅;模型组甲状腺上皮细胞Fas、FasL免疫阳性物呈深棕色,在甲状腺上皮细胞表达广泛,范围大,颜色深。雷公藤组和柴贝片治疗组甲状腺上皮细胞表达Fas、FasL免疫阳性物颜色较模型组明显变浅,范围明显变小;柴贝片治疗组甲状腺上皮细胞Fas、FasL表达较雷公藤组无明显差异。结论:1.柴贝片能够通过降低自身免疫性甲状腺炎型大鼠的血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)的水平达到治疗目的。2.柴贝片能减轻自身免疫性甲状腺炎模型大鼠甲状腺淋巴细胞的浸润程度,减轻炎性反应。3.柴贝片和雷公藤多苷片均能有效抑制自身免疫性甲状腺炎模型大鼠甲状腺上皮细胞的凋亡。