【摘 要】
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目前,土壤盐渍化严重影响农林业生产和生态环境,如何使大片的盐碱地以及丰富的咸水资源被充分利用,成为当前研究的热点问题。而多胺(polyamines,PAs)对提高植物抗逆性起着重
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目前,土壤盐渍化严重影响农林业生产和生态环境,如何使大片的盐碱地以及丰富的咸水资源被充分利用,成为当前研究的热点问题。而多胺(polyamines,PAs)对提高植物抗逆性起着重要的作用,为此,本研究开展了对多胺合成途径中的相关基因苹果亚精胺合成酶(apple spermidine synthase genes1,MdSPDS1)的基因功能分析,并首次将其转入毛白杨(Populus tomentosa Carr.)中,从而提高转基因毛白杨的耐盐能力。本研究工作结果如下:(1)农杆菌介导法将MdSPDS1基因转入普通烟草(Nicotiana tabacum)中,采用实时荧光定量PCR方法和高效液相色谱法(HPLC)分别检测了植株中MdSPDS1基因的相对表达情况,以及三种主要多胺——腐胺、亚精胺、精胺(Put、Spd、Spm)的含量,结果发现转MdSPDS1基因的烟草中Spd含量是非转基因的2-3倍。(2)在初步探讨MdSPDS1基因功能中,耐盐性分析时发现MdSPDS1表达量高的转基因烟草D14可以在400mM的NaCl胁迫下生存,在进一步的多胺含量变化趋势测定中,结果表明Spd的含量和(Spd+Spm)/Put比值的增加对提高植物的耐盐性起到重要的作用。同时在转基因烟草抗病性分析中,D14的抗烟草花叶病毒(TMV)能力强于为转基因植株WT,WT植株感病后,Put含量比初始增加了5倍多,而D14中Spd含量增加4倍左右,暗示Spd的增加可能是促进植物抗烟草花叶病毒能力提高的原因。(3)初步建立了毛白杨遗传转化体系,对卡那霉素抗性芽进行了PCR和Southern检测,结果表明,成功获得了转MdSPDS1基因的毛白杨植株。并测定了转基因毛白杨中MdSPDS1基因相对表达量和多胺的含量,其中T7的Spd含量是未转化植株的1.65倍。转基因毛白杨耐盐性初步分析中发现转MdSPDS1基因的毛白杨可以在200mM的盐胁迫下生存。
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