目的:探讨右美托咪定预处理对7日龄SD幼鼠吸入异氟烷后海马区神经细胞凋亡的影响及其相关机制。　　方法:　　1、实验动物分组及模型的制备　　7日龄SD大鼠90只（中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供），15.2±3.2 g，随机分为3组，每组30只，即对照组(Con group)腹腔注射生理盐水150μl;异氟烷组（Iso group）腹腔注射生理盐水150μl;右美托咪定组(Dex group)腹腔注射右美托咪定（50μg/kg）150μl。15分钟之后对照组吸入40％的氮氧混合气体4小时，异氟烷组和右美托咪定组吸入2％异氟烷与40％氮氧混合气体4小时。　　(1)麻醉结束后2小时各组随机选取10只鼠用戊巴比妥钠(100mg/kg)麻醉，4％多聚甲醛心脏灌注断头取脑，用TUNEL法（原位末端标记法）检测海马神经细胞凋亡率，免疫组化法检测海马神经细胞中proBDNF、phospho-JNK、BDNF、phospho-ERK和Caspase3的蛋白表达情况。　　(2)麻醉结束后2小时各组随机选取8只SD幼鼠断头取脑，冰上剥离海马，应用Western-blot法（免疫印迹法）检测海马组织中proBDNF、phospho-JNK/JNK、BDNF、phospho-ERK/ERK和Caspase3的蛋白表达情况。　　(3)剩余大鼠分别养至4周龄，各组随机选取6只SD幼鼠断头取脑，冰上剥离出海马，用Western-blot法（免疫印迹法）检测海马组织中proBDNF、phospho-JNK/JNK、BDNF、phospho-ERK/ERK和Caspase3的蛋白表达情况。另外，各组剩余的6只SD大鼠，用4％多聚甲醛经心脏灌注之后断头取脑，用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡率，免疫组化法检测海马神经细胞中proBDNF、phospho-JNK、BDNF、phospho-ERK和Caspase3的蛋白表达情况。　　2标本的采集处理及检测方法　　2.1 TUNEL法检测海马神经细胞凋亡率　　对照组、异氟烷组及右美托咪定组麻醉结束2h后各组选取10只腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，固定在动物解剖台上，剪开胸腔，从心尖处插入圆头针，同时从右心耳处剪开心脏放血，幼鼠在同时间点先后灌注0.9％生理盐水5ml冲洗和4％多聚甲醛磷酸缓冲液5ml固定。注射完毕后立即断头，把幼鼠大脑从头颅中取出浸泡在福尔马林溶液中，用4％的多聚甲醛后固定，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸腊，包埋，蜡块行连续冠状切片，片厚2.5μm，CA1、CA2、CA3以及齿状回区连续切片备用，用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡率。　　2.2免疫组化法检测蛋白的表达　　对照组、异氟烷组及右美托咪定组麻醉结束2h后各组选取10只腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，固定在动物解剖台上，剪开胸腔，从心尖处插入圆头针，同时从右心耳处剪开心脏放血，幼鼠在同时间点先后灌注0.9％生理盐水5ml冲洗和4％多聚甲醛磷酸缓冲液5ml固定。注射完毕后立即断头，把幼鼠大脑从头颅中取出浸泡在福尔马林溶液中，用4％的多聚甲醛后固定，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸腊，包埋，蜡块行连续冠状切片，片厚4μm，CA1，CA2，CA3以及齿状回区连续切片备用。用免疫检测法检测海马神经细胞中proBDNF、phospho-JNK、BDNF、phospho-ERK和Caspase3的蛋白表达情况。　　2.3 Western-blot实验检测海马细胞蛋白表达情况　　对照组、异氟烷组及右美托咪定组麻醉结束2h后各组选取8只SD幼鼠断头取脑，把大脑放置在冰上分离海马组织，然后把海马放在裂解液里放置在冰上超声匀浆，离心机上4℃12000r/min离心30min，取上清。Western-blot实验检测在发育中SD大鼠海马神经细胞中proBDNF、phospho-JNK/JNK、BDNF、phospho-ERK/ERK和Caspase3的表达情况。　　计量资料用均数±标准差（(x0±s）表示，采用SPSS21.0进行统计学处理，作图采用GraphPad Prism5.0软件。正态性检验后做方差齐性检验，方差齐的组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，方差不齐的组间比较采用多个独立样本的秩和检验，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。　　结果:　　一、7日龄大鼠各项指标的变化　　1、异氟烷引起的海马区的神经损伤　　实验中所有的大鼠均为存活状态，Tunel染色结果显示，与对照组相比(0.0117±0.0043)，异氟烷组(0.0348±0.0086)的大鼠海马区的神经元凋亡指数显著增多(P＜0.001，图1);western blot结果中，异氟烷组的凋亡标记蛋白Caspase3表达明显高于对照组（P＜0.001，图2）;另外，应用免疫组化法检测的结果与western blot结果一致，异氟烷组的Caspase3明显比对照组表达水平高(P＜0.01，图3)。　　2、右美托咪定提供神经保护作用　　Tunel染色结果显示，右美托咪定能够明显降低异氟烷引起的新生鼠海马区神经元的凋亡（P＜0.001，图1）。Western blot和免疫组化两种方法检测结果均显示，与异氟烷组相比，右美托咪定组大鼠海马内Caspase3的表达显著减少(P＜0.001，图2;P＜0.01，图3)。　　3、各组中BDNF和proBDNF表达水平的变化　　Western blot结果表明，异氟烷能够明显降低BDNF的表达(P＜0.001，图2)，而右美托咪定能够逆转这种变化(P＜0.001，图2)。另外，与对照组相比，异氟烷组proBDNF的表达显著增多(P＜0.001，图2)，而右美托咪定组与异氟烷组相比，proBDNF表达水平明显降低(P＜0.001，图2)。与上述结果一致，免疫组化方法检测显示，右美托咪定能够逆转异氟烷引起的SD幼鼠海马区BDNF和proBDNF的变化(P＜0.01，图3)。　　4、phospho-ERK和phospho-JNK的表达　　western blot结果显示，与对照组相比，异氟烷组phospho-JNK46/JNK46(P＜0.01，图4)、phospho-JNK54/JNK54（P＜0.01，图4）表达增多，phospho-ERK42/ERK42(P＜0.01，图4)、phospho-ERK44/ERK44（P＜0.01，图4）表达减少。而右美托咪定组比异氟烷组phospho-JNK46/JNK46(P＜0.001，图4)、phospho-JNK54/JNK54(P＜0.001，图4)表达减少，phospho-ERK42/ERK42（P＜0.001，图4）、phospho-ERK44/ERK44（P＜0.001，图4）表达增加。　　二、28日龄大鼠各项指标的变化　　Tunel结果、免疫组化结果以及western blot结果均显示，28日龄大鼠各项指标的表达在各组中均无显著差异。　　结论:　　1、本实验首次发现，右美托咪定能够降低proBDNF的表达，可能通过抑制JNK的激活，减弱异氟烷毒性;　　2、右美托咪定能够增加BDNF的表达，可能通过促进ERK的激活，起到神经保护作用;　　3、本实验证实，右美托咪定能够降低异氟烷引起的海马区神经元的凋亡;　　4、异氟烷引起的海马区神经损伤，在机体自身成长中可以得到修复;