【摘 要】
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第一部分:TACE基因膜外功能区在大肠杆菌 中高水平表达和纯化;目的:构建人TACE基因膜外功能区cDNA片段的原核表达载体,在大肠杆菌中高水平表达并进行分离纯化,探讨影响TACE在
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第一部分:TACE基因膜外功能区在大肠杆菌 中高水平表达和纯化;目的:构建人TACE基因膜外功能区cDNA片段的原核表达载体,在大肠杆菌中高水平表达并进行分离纯化,探讨影响TACE在大肠杆菌表达系统中高效及可溶性表达的因素,并获得较高纯度蛋白为进一步制备TACE抗血清以及用噬菌体肽库筛选TACE抑制剂打下基础.方法:利用该室已克隆到的TACE基因膜外功能区和含有二硫键异构酶(DsbA和DsbA)的原核表达载体构建融合表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE凝胶电泳分析产生的蛋白为可溶或是包涵体形式;用Ni柱分离纯化TACE膜外功能区蛋白.结论:利用分子伴侣融合蛋白技术使TACE膜外功能区在原核表达系统中获得了高效表达,且分离纯化到了较高纯度的蛋白,为下一阶段工作打下了必要的基础.第二部分:以GFP为报告基因探讨外源基因在野生型地衣芽孢杆菌20386中表达的可行性;目的:考察野生型地衣芽孢杆菌20386表达外源基因的可能性和表达能力.为利用生物活性基因在该菌株中的表达以开发新一带基因修饰微生态制剂作出有益的探索.方法:利用大肠杆菌—枯草芽孢杆菌穿梭表达载体在大肠杆菌DH5 α中构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组质粒,通过电转化将重组质粒转入到野生型地衣芽孢杆菌20386中表达,在紫外光照射下检测绿色荧光蛋白的存在. 结论:外源基因在野生型地衣芽孢杆菌20386中能够表达.但在液体LB中培养时,可能会被该菌自身分泌的蛋白酶分解,还需进一步研究.
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