论文部分内容阅读
目的：1.观察柚皮苷(Naringin, NG)对破骨细胞的影响。2.观察柚皮苷对去势大鼠骨质疏松的影响。3.观察柚皮苷对去势大鼠骨质疏松骨折的影响。方法：1.利用来自小鼠的破骨前体RAW264.7细胞株,采用含有浓度为100ng/mL的小鼠重组可溶性核因子KB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κ B ligand, RANKL)的高糖DMEM (High glucose Dulbecco minimum essential medium)培养基,诱导培养实验用的成熟破骨细胞。利用TRAP染色与扫描电子显微镜观察破骨细胞形成的骨吸收陷窝的方法鉴定破骨细胞。流式细胞术检测破骨细胞的凋亡率,RT-PCR检测破骨细胞凋亡相关基因Bcl-2、BAX、 caspase-3以及基质金属蛋白酶9(MMP-9),组织蛋白酶K (Cath-K),抗酒石酸酸性磷酸酶(T RAP) mRNA表达情况。2.3月龄雌性S-D大鼠随机分为去势组(OVX),假手术组(SHAM),柚皮苷(40mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)组与雌激素组(22.5μg/kg)阳性对照组,去势组手术切除大鼠双侧卵巢,假手术组只切开皮肤,不做卵巢切除。切除卵巢后3月开始灌胃给药,给药周期为60天。观察各组大鼠股骨骨密度,Micro-CT参数,血清生化指标,股骨力学性能与骨形态计量学,并进行组间比较。3.采用3月龄雌性SD大鼠行双侧卵巢切除,饲养3个月后手术造成大鼠右侧胫骨横行骨折,术后按照随机数字表法分为对照组(20只)、柚皮苷组(20只)雌激素组(20只)。柚皮苷组每天灌服柚皮苷100mg/kg/d;雌激素组灌服17-β雌二醇22.5(μg/kg/d;对照组给予等体积的等渗盐水皮下注射。术后分别于2,8周处死动物后,取出手术侧胫骨,行X线拍片进行评分；然后行双能X线吸收测定法骨折部位骨密度(BMD)；检测BMD后,采用Micro-CT对骨折部位进行定量分析,检测指标：骨体积(BV)、相对骨体积比(BV/TV)、平均骨小梁厚度(Tb.Th);酶联免疫吸附实验(Elisa)测定血清骨钙素与大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1);三点弯曲力学实验测定骨折最大载荷,并进行统计学分析。结果：1.单用RANKL (100ng/ nl)诱导即可获得破骨细胞。柚皮苷可以降低TRAP阳性细胞数,减少骨吸收陷窝数目；促进破骨细胞的凋亡；柚皮苷干预组Bcl-2、 MMP-9、Cath-K、TRAP mRNA的表达降低,BAX与caspase-3 mRNA表达升高。2.用药60天,与去势组比较,中、高剂量柚皮苷组体重降低；雌激素与柚皮苷组骨密度,骨小梁数目增多；血钙降低,雌激素与骨钙素升高；大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1)降低,对总胆固醇有调节作用,增加矿化率、提升股骨力学性能。3.术后第2周柚皮苷组X线评分、BMD、Tb.Th、骨钙素、最大载荷较对照组明显升高(P<0.05); BV、BV/TV较对照组明显升高(P<0.01)；血CTX-1较对照组明显降低(P<0.01)；BV、最大载荷较雌激素组也升高(P<0.05)；骨钙素较雌激素组明显升高(P<0.01)；雌激素组X线评分、BMD、BV、BWTV,Tb.Th、最大载荷较对照组亦升高(P<0.05)；雌激素组骨钙素、CTX-1较对照组降低(P<0.05)；柚皮苷组X线评分、BMD、BWTV、Tb.Th、CTX-1与雌激素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。8周时柚皮苷组X线评分、BMD、BV、BV/TV、Tb.Th较对照组升高(P<0.05)；而柚皮苷组与雌激素组差异无统计学意义；柚皮苷组骨钙素、最大载荷高于对照组与雌激素组(P<0.05)结论：柚皮苷可减少破骨细胞数量、降低骨吸收功能,促进破骨细胞凋亡；其机制可能是通过降低BCL-2 mRNA表达,升高BAX mRNA表达,激活caspase-3从而使破骨细胞凋亡来实现的。柚皮苷可以提高去势大鼠BMD,增加骨小梁数量,改善骨代谢,提高股骨的力学性能；柚皮苷提升大鼠骨质疏松骨折部位BMD、BV、BV/TV、Tb.Th,改善骨代谢,从而提高骨折愈合最大载荷。