大鼠血管平滑肌钙激活钾通道蛋白表达的增龄性变化及PI3K抑制剂对通道蛋白表达的影响

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:llww6
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目的:对不同年龄组及加入PI3K特异性抑制剂处理的大鼠胸主动脉平滑肌细胞上钙激活钾通道的α单位蛋白表达水平进行半定量分析,探讨血管老化过程中钙激活钾通道α单位蛋白表达变化及其意义以及PI3K特异性抑制剂ILY294002对通道蛋白表达的影响。 方法:大鼠分为青年组5只(6~8月龄,体重250~300g)和老龄组5只(15~18月龄,体重250~300g)。取大鼠胸主动脉用酶消化法(Ⅱ型胶原酶)做原代培养并传代,提取2~3代细胞总蛋白,青年组及老龄组2~3代细胞加入PI3K特异抑制剂LY29400抑制PI3K途径,药物作用72小时后提取细胞总蛋白,采用免疫印迹法检测各组钙激活钾通道的α单位蛋白表达量,采用GDAPH作为内参,以钙激活钾通道α单位蛋白条带的光密度值与GDAPH条带的光密度值之比来表示钙激活钾通道α单位蛋白表达量。 结果: 1.老龄组BKca α-亚单位与GDAPH相对光密度比值为0.32±0.06,青年组为0.80±0.15。老化组与青年组相比结果有显著性差异(P<0.05),老年组为青年组的41%。 2.青年组加入LY294002前后BKca α-亚单位与GDAPH相对光密度比值为分别为0.80±0.15和0.41±0.08,加药后为加药前的51%,加药后较加药前显著降低(P<0.05)。 3.老龄组加入LY294002前后的BKcaα-亚单位与GDAPH相对光密度比值为分别为0.32±0.06和0.14±0.05,加药后为加药前的43.75%,加药后显著降低,(P<0.05)。 4.老龄组和青年组加入LY294002后BKca α-亚单位与GDAPH定量比值分别为0.14±0.05和0.41±0.08,老龄组为青年组的34.14%。 结论:细胞老化血管上的血管平滑肌上钙激活钾通道的蛋白(Bkca)表达随年龄增长减少可能是血管老化过程中其舒缩能力下降的重要分子生物学机制。
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