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【目的】
探讨壳寡糖预处理对大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤回肠组织TLR4表达的影响。
【方法】
1.采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制作轻度和重度肠缺血再灌注损伤模型。将40只成年雄性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组(A组)、重度缺血再灌注损伤组(B组)、轻度缺血再灌注损伤组(C组)、壳寡糖对轻度及重度缺血再灌注损伤预处理组(E及D组)。
2.标本处理:取出的回肠组织立即大体观察,并作一记录,部分组织用10%甲醛固定,常规石蜡切片,HE染色,光镜下观察,部分组织立即置于-70℃冰箱保存留做实时定量PCR。
3.应用HE染色观察回肠组织病理改变。
4.免疫组化法测定肠组织TLR4蛋白表达部位和强弱。
5.实时定量PCR检测回肠组织TLR4mRNA的表达变化。
【结果】
1.肠缺血组(B组和C组)大鼠小肠粘膜明显出血、糜烂,而壳寡糖预处理组(D组和E组)大鼠小肠出血、糜烂病变明显改善(P值均<0.05)。
2.假手术组(A组)仅在肠黏膜的表面有比较弱的TLR4表达(0.132±0.006);而缺血再灌注损伤组(B组和C组)的回肠黏膜表面、黏膜固有层的T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、黏膜下层的动静脉、纵形和环形肌层等处TLR4表达都比较强(分别为0.212±0.007和0.164±0.017);预处理组(D及E组)回肠黏膜TLR4表达分别为0.182±0.023和0.144±0.008,分别弱于缺血再灌注损伤组(P值均<0.05)。
3.假手术组(A组)TLR4mRNA表达值为1.091±0.340,而缺血再灌注损伤组(B组和C组)TLR4mRNA表达水平分别为9.376±2.581和3.703±1.092,均高于A组(P值均<0.01),预处理组(D及E组)回肠组织TLR4mRNA表达水平分别为3.105±0.973和1.295±0.294,分别低于缺血再灌注损伤组(P值均<0.01)。
4.回肠组织的TLR4蛋白与TLR4mRNA表达强度均与肠黏膜病理学改变相关(P值均<0.01),TLR4蛋白表达强度亦与TLR4mRNA表达水平相关(P<0.01)。
【结论】
壳寡糖预处理可通过抑制TLR4的表达以缓解大鼠肠缺血再灌注损伤。