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目的肝癌患者的免疫系统不能有效地清除或杀伤癌细胞,是导致肝癌难以治愈、复发和转移的重要因素之一。吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase ,IDO)是一种可使机体产生获得性免疫耐受的酶类,也是肝脏以外唯一可催化色氨酸氧化裂解的限速酶。研究表明在多个肿瘤组织中IDO的高表达与调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)浸润数量增多有关,故IDO和Treg细胞有望成为潜在的生物治疗靶点。本研究旨在探讨肝癌环境中IDO的高表达与Treg细胞的数量关系,以及对肝癌细胞和T淋巴细胞的作用,为肝癌的生物和免疫治疗提供新的理论基础和临床依据。方法提取健康人外周血中的T细胞利用细胞培养和基因转染技术将T细胞和肝癌细胞混合培养。实验分为六组:根据是否加入D-1-MT分为未干预组和干预组,每组根据培养细胞的不同又分为T细胞与HepG2细胞组、T细胞与pcDNA3.1-HepG2细胞组、T细胞与pcDNA3.1-IDO- HepG2细胞组。于混合培养2天后应用流式细胞术、MTT法检测各组中HepG2细胞的凋亡情况和T细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性。在混合培养5天后应用流式细胞术检测Treg细胞的比例。并建立人肝癌细胞小鼠模型,用流式细胞仪检测荷瘤小鼠外周血中Treg细胞的比例。结果1、流式细胞仪分析混合反应体系中HepG2细胞的凋亡率,未干预组中高表达IDO的pcDNA3.1-IDO- HepG2细胞早期凋亡率明显低于pcDNA3.1-HepG2细胞和普通HepG2细胞,分别为(1.65±0.14)%,(7.17±0.24)%,(6.93±0.33)%,前者与后二者比较差异具有统计学意义(P<0.05);而干预组中HepG2细胞凋亡率均高于干预前,即(4.41±0.70)%,(10.50±1.51)%,(11.55±1.05)%,干预前后比较有统计学意义(P<0.05)。2、MTT实验显示,未干预组中IDO-HepG2细胞组T细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性明显低于空质粒转染组和空白对照组,其测定值为(35.00±2.20)%,(74.51±1.44)%,(75.30±1.67)%,前者与后二者比较有统计学意义(P<0.05);而1-MT干预后,T细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性均高于未干预组,即(71.33±2.10)%,(81.27±2.42)%,(80.91±1.95)%,干预前后差异有统计学意义(P<0.05)。3、流式细胞仪分析混合反应体系中Treg细胞的比例,未干预组中IDO-HepG2细胞组Treg细胞比例明显高于空质粒转染组和空白对照组,即(10.53±1.05)%,(4.03±0.17)%,(3.34±0.18)%,前者与后二者比较有统计学意义(P<0.05);分别加入1-MT干预后,Treg细胞比例均低于未用1-MT干预组,其值为(6.37±0.15)%,(1.43±0.10)%,(1.57±0.13)%,干预前后差异有统计学意义(P<0.05)。4、人肝癌小鼠模型中,流式细胞仪分析小鼠外周血中Treg细胞的比例,高表达IDO的荷瘤小鼠外周血Treg细胞比例明显高于空质粒转染组和空白对照组,即(15.33±1.18)%,(8.96±0.53)%,(8.14±0.57)%,前者与后二者比较有统计学意义(P<0.05)。结论1、IDO可能通过增加调节性T细胞的比例来抑制肝癌细胞(HepG2细胞)的凋亡和T细胞的免疫毒性功能。1-MT可抑制IDO的这种作用。2、在体实验证实IDO的过量表达可提高外周血Treg细胞的比例。