内生菌是一类生长于活体植物组织中的特殊的微生物,在研究过的植物中普遍存在,并且内生菌能够产生与宿主相同或相似的生物活性物质。从内生菌中筛选活性高的内生菌株为寻找新型生物活性物质开辟了一条新的道路。食用菌是美食良药兼用的大型真菌,目前有关食用菌内生菌报道极少,并且主要是探讨一些野生食用菌菌种人工栽培难是否与子实体内的某些菌群有关的问题。为了更好的了解和利用食用菌内生菌资源,寻找到能产生与食用菌宿主相同或者相似的生物活性物质的内生菌株,更好地了解不同类群食用菌栽培方式和食用菌内生菌分离方法与内生菌在食用菌组织中的生态分布及数量之间的关系,本研究采用不同栽培方式的白蘑菇、香菇、秀珍菇、金针菇、猪肚菇、茶树菇子实体为研究对象,分别采用研磨法、组织块法、印迹法三种方法分离食用菌内生菌试图寻找到食用菌内生菌的多样性和内生菌在食用菌组织中的生态分布规律。本研究研磨法从白蘑菇子实体中筛选出抑菌活性显著的内生菌株AB-114,对其分类地位、抗菌物质提取鉴定进行了系统研究,主要试验结果如下:1、用研磨法从六种食用菌子实体中共分离内生菌58株,其中白蘑菇、香菇、秀珍菇内生菌数量分别为27、19、12株,其它三种食用菌未分离到;通过抑菌试验分离到具有抑菌作用的内生菌共15株,其中白蘑菇9株、香菇4株、秀珍菇2株,总抑菌率为29%。用组织块法从六种食用菌子实体中共分离内生菌21株,白蘑菇12株,香菇3株,秀珍菇6株,其它三种食用菌未分离到;印迹法未分离到食用菌内生菌。AB-114活菌拮抗试验和发酵液拮抗试验结果表明:该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、木霉四种病原菌都表现出强的抑制作用,特别是对大肠杆菌、酵母菌和木霉,抑菌圈均达到了15 mm以上,所以AB-114菌株具有一定的研究和应用潜力。2、对内生细菌AB-114菌株的形态和分子鉴定进行深入的研究,AB-114的生物学特性表明:该菌株的pH值适应范围较广,但在pH低于5.0菌体生长受到明显抑制,最适培养pH值为7.0;最适温度为30℃,致死温度为70℃。该菌为需氧菌,可以发酵葡萄糖产酸、水解淀粉,能利用柠檬酸盐、丙二酸盐,不产生硫化氢,能还原硝酸盐,产生吲哚等。其16 SrDNA经测定全长是1440 bp,将此序列通过BLAST程序与GenBank中收集的氨基酸序列比对,结果表明,AB-114菌株与多个假单胞菌属细菌聚类于一个分支上,同源性都在99%以上,基于生物学特性和16 SrDNA序列分析,将AB-114菌株归类于假单胞菌属。3、采用有机溶剂沉淀法和溶媒萃取法对AB-114菌株发酵液产生的抑菌活性成分进行初步提取。结果表明:有机溶剂沉淀法提取抗菌成分的效果要比溶媒萃取效果好,但是有机溶剂沉淀法对有机溶剂的使用量大,因此选用溶媒萃取法初步提取AB-114菌株的抗菌成分。结合薄层层析(TLC)、生物活性追踪分离方法和高效液相色谱(HPLC)得到AB-114菌株代谢产物活性最好、含量最高的两种组分,化学颜色反应表明该两种组分为生物碱类