【摘 要】
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目的三叉神经节(Trigeminal ganglion,TG)是三叉神经传导通路的主要初级传入神经元,主要负责调控颌面部的各种感觉功能。Delta阿片受体(Delta opioid receptor,DOR)表达于三叉神经节神经元的胞体和神经纤维中,在调节三叉神经系统相关性疼痛、炎症反应及神经损伤等发挥着重要作用。糖基转移酶是催化多种糖基化产物形成的关键酶,这些糖基化产物具有多种生物学功能。糖基转
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目的三叉神经节(Trigeminal ganglion,TG)是三叉神经传导通路的主要初级传入神经元,主要负责调控颌面部的各种感觉功能。Delta阿片受体(Delta opioid receptor,DOR)表达于三叉神经节神经元的胞体和神经纤维中,在调节三叉神经系统相关性疼痛、炎症反应及神经损伤等发挥着重要作用。糖基转移酶是催化多种糖基化产物形成的关键酶,这些糖基化产物具有多种生物学功能。糖基转移酶有多种类型,其中β-1,3-半乳糖基转移酶2(β-1,3-galactosyltransferase 2,B3galt2)是β-1,3-半乳糖基转移酶家族中的一员,在中枢和周围神经系统中呈较高表达。已发表的研究结果表明,β-1,3-半乳糖基转移酶2表达于三叉神经节,在周围神经炎症诱导的三叉神经节内神经元的致敏性中发挥重要作用。但是,β-1,3-半乳糖基转移酶2基因在正常三叉神经节中的作用还不十分清楚,该研究应用β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除小鼠研究B3galt2在成年小鼠三叉神经节中的作用及其机制,从而为进一步研究在三叉神经系统及相关疾病中的作用提供必要的理论依据。方法使用β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除杂合子小鼠进行繁育,并提取基因组DNA进行PCR鉴定基因型,从而获得来自同一窝、相同性别的成年(6个月)野生型、杂合子和纯合子小鼠。利用X-gal染色和β-gal免疫荧光染色观察三叉神经节中β-1,3-半乳糖基转移酶的表达。通过免疫荧光技术,使用anti-Neu N和anti-Peripherin抗体,比较野生型、杂合子和纯合子小鼠三叉神经节中神经元及感觉神经的变化。同时,利用免疫荧光技术,使用anti-GFAP和anti-Iba1抗体分别观察野生型、杂合子和纯合子小鼠三叉神经节中神经胶质细胞的变化。此外,还应用免疫荧光和实时定量PCR技术观察和分析野生型、杂合子和纯合子小鼠三叉神经节中Delta阿片受体蛋白和基因的表达水平。结果1、通过β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除小鼠杂合子的合笼繁育,成功获得来自同一窝及相同性别的成年野生型、杂合子和纯合子小鼠。并且应用X-gal染色的方法观察到β-1,3-半乳糖基转移酶2基因在成年小鼠三叉神经节内表达。2、β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除明显减少成年小鼠三叉神经节内成熟神经元和感觉神经元数目,明显增加胶质细胞标记性蛋白(GFAP和Iba1)的表达。同杂合子比较,纯合子小鼠三叉神经节内神经元和胶质细胞的改变更明显。3、β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除明显降低成年小鼠三叉神经节内Delta阿片受体蛋白和基因表达。结论β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除影响成年小鼠三叉神经节内神经细胞、神经胶质细胞及Delta阿片受体,提示β-1,3-半乳糖基转移酶2基因在三叉神经节中发挥着重要的作用。该研究为进一步研究β-1,3-半乳糖基转移酶2在三叉神经痛疾病中的作用及机制研究提供了一定的实验基础。
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