雄蚕蛾是滋补强身的佳品,其抗疲劳功效也在临床实践中得到证实,但目前的研究和产品开发多集中于雄性激素、蜕皮激素等活性成分。雄蚕蛾中蛋白含量高达40%以上,可通过酶解技术挖掘其功能因子,拓宽其利用领域。本论文以雄蚕蛾为原料,利用酶解技术制备雄蚕蛾多肽,通过超滤进行分级分离,系统研究了其体外抗氧化活性及稳定性,并通过动物实验评价了其抗疲劳作用。本研究有助于开发天然、安全、高效的抗疲劳食品基料,同时为科学全面地利用雄蚕蛾资源提供了依据。1、建立了高效的酶解工艺。实验以蚕蛾粉为原料,对p H、温度、时间、酶配比、料液比及酶用量等进行单因素实验,控制雄蚕蛾蛋白酶解的水解度和肽得率双指标,得到的最佳条件为p H10,温度为50℃,时间120min,底物浓度7.5%,双酶(Alcalase碱性蛋白酶、丹尼斯克碱性蛋白酶)复配比例为1:2,酶活为5000U/g。随后采用Box-Benhnken中心组合实验设计法对酶解条件进行优化,建立p H、温度、时间、料液比等四因素的酶解效率回归模型。经过Design-Expert软件对数据进行回归分析并结合试验验证的结果,确定的最佳酶解条件为:p H9.5、温度55℃、时间130min、底物浓度7.0%。在此工艺条件下验证结果为水解度27.32%,肽得率50.43%,综合值40.47%。建立的回归模型可以较好的预测酶解效果,对实际生产应用有一定指导意义。2、对雄蚕蛾多肽进行分离分级及抗氧化活性研究。确定了雄蚕蛾蛋白质和水解物的分子量分布情况,将透析后的雄蚕蛾酶解物进行超滤分级,得到五个组分,分别为MSH-I(MW>30k Da),MSH-II(10–30k Da),MSH-III(5–10k Da),MSH-IV(3–5k Da)和MSH-V(<3k Da),对超滤组分的氨基酸组成进行了分析和抗氧化活性体外测定,发现小于3KDa的组分抗氧化能力最强,相应ORAC和DPPH的Trolox当量值分别为1950μmol/g和275μmol/g。3、系统研究了雄蚕蛾多肽的稳定性。发现雄蚕蛾多肽在Na Cl浓度低于4%,25—60℃及中性p H的加工贮藏条件下,抗氧化活性能保持较高水平,而随着光照时间的延长,其抗氧化活性有所减弱,宜采用避光保存。经模拟胃肠消化后,雄蚕蛾多肽仍具有较高的抗氧化活性,说明其抗消化稳定性较好,具有在人体内发挥功效的潜力。4、研究雄蚕蛾多肽对小鼠抗疲劳作用及机理。动物实验将小鼠分为五组,分别为空白对照组,实验对照组,低剂量组,中剂量组和高剂量组,饲喂时间为期一月,然后对各实验组进行睡眠剥夺处理,随后进行负重游泳耐力实验和生理生化指标的检测。结果表明,游泳时间空白组高于实验组,睡眠剥夺有助于建立精神/运动疲劳模型;灌胃雄蚕蛾多肽的小鼠较对照组力竭游泳时间显著延长,各项生理生化指标和能量代谢强度指标均有所提高,肌肉组织切片的纤维结构也有所改善,表明雄蚕蛾多肽具有抗疲劳作用;灌胃雄蚕蛾多肽中剂量组的各项指标优于高剂量组,更优于低剂量组,其量效关系有待进一步深入研究。