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喹诺酮是一类合成抗生素类药物,英文名称:quinolones(QNs)。在化学上与萘啶酮酸相关,其作用机理是直接作用于细菌的核、抑制细菌的DNA旋转酶,使酶不能在DNA双链上引入切口,破坏细菌的代谢和繁殖,迅速杀灭细菌。最初这类药物用于治疗尿道感染,现在已发展到治疗系统感染疾病,并且在动物饲养中作为预防和治疗药物普遍使用。近年来,这些药物在动物组织中的残留已引起广泛的注意。通过将诺氟沙星烷基化合成诺氟沙星衍生物,经过紫外、液质以及核磁共振检测后,采用戊二醛法分别与BSA和OVA偶联。再利用活化酯法将五种喹诺酮药物直接与BSA和OVA偶联。经紫外鉴定,半抗原与蛋白质的偶联均成功。分别免疫兔子,制备多克隆抗体,经筛选,效价为102400的诺氟沙星衍生物的抗血清较好。以此抗血清为基础,初步建立了基于多克隆抗体的间接ELISA方法,来检测QNs。并通过改变相关的物理、化学影响因素,例如:包括包被溶液、抗体稀释液、封闭液、竞争时间、抗体与标准溶液的体积比等,对ELISA方法进行优化,进而在ELISA条件下获得更好的结果。优化后,最终得到标准曲线,检测限(IC90)为0.0126 ng/mL、半数抑制量(IC50)为0.54 ng/mL和检测范围(IC20～IC80)为0.04467～14 ng/mL。此外,还从方法的特异性、准确性、灵敏度来评估了本ELISA方法。回收率分别是63%～95%,变异系数小于20%。除与5种QNs的交叉反应低于5%外,其余13种QNs分别在16%和112%之间,符合多残留ELISA方法检测的要求。同时建立了猪肉和鱼肉中MAR、ENO、OFL、PEF、NOR、CIP、LOM、DAN、ENR、SAR、DIF、OXO、FLU等等19种QNs的HPLC–ESI–MS/MS确证测定方法。本方法通过添加回收试验,变异系数测定,表明本方法完全符合目前国内国际上对动物性食品中兽药残留确证要求。