生物制品作为生物医药行业中重要的产品之一,其分离纯化效率受到人们的广泛关注,层析作为蛋白质分离纯化的主流技术,其核心技术在于层析介质,层析介质结构对层析效率有着至关重要的影响。因此,研究层析介质结构与色谱性能之间的关系对于提高蛋白分离效率有着重要意义。本课题选择聚丙烯酸酯类微球作为研究对象,对其结构与色谱性能之间的关系进行了研究。主要工作内容如下:（1）以悬浮聚合法制备了甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇二甲基丙烯酸酯的共聚微球,系统考察了致孔剂组分的比例及单体含量对微球孔径的影响规律,通过调节三元致孔剂组分的比例及单体含量制备了比表面积在2.5～207.4 m2/g范围内的聚丙烯酸酯微球。基于该微球偶联了聚乙烯亚胺（PEI）,制备了弱阴离子交换层析介质。考察了PEI加入量对PEI偶联量（离子交换容量）的影响,发现随PEI加入量的增加PEI偶联量增加。（2）以该弱阴离子交换层析介质为研究对象,系统考察了离子交换容量、PEI分子对介质的蛋白吸附容量和结构的影响规律,结果表明:1)当离子交换容量小于165.5 mmol/L时,介质的静态蛋白载量和动态蛋白载量均随离子交换容量的上升而迅速增加;当离子交换容量大于165.5 mmol/L时,随着离子交换容量的增加,介质的静态蛋白载量缓慢上升,而动态蛋白载量则呈下降趋势;2)偶联PEI对不同孔径分布微球的比表面积的影响程度不同,当偶联前微球的比表面积小于65 m2/g时,偶联PEI对介质比表面积影响较小,而当偶联前微球的比表面积大于65 m2/g时,微球小孔比例较大,偶联PEI会导致1～4 nm孔隙堵塞,使介质比表面积明显下降;3)同时发现随着微球比表面积的增加,介质的静态蛋白载量先增加后减小,在比表面积为170 m2/g时达到峰值;4)偶联PEI会造成介质内1～4 nm范围内孔体积的显著减小,但对64 nm以上孔径的孔隙影响较小。（3）使用逆体积排阻色谱法（ISEC）测定了偶联PEI的聚丙烯酸酯微球的孔径结构,并用对数正态分布函数对实验结果进行拟合,得到了良好的拟合效果。通过分析发现,相比率直接影响介质的静态蛋白载量及动态蛋白载量。还研究了牛血清白蛋白（BSA）和牛甲状腺球蛋白在不同介质上的静态蛋白载量,发现,小孔径介质有利于BSA（1.9688 mmol/mg）的吸附,而大孔径介质更有利于牛甲状腺球蛋白（0.2110 mmol/mg）的吸附。（4）利用偶联PEI的聚丙烯酸酯微球对模型蛋白及鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白进行了分离。考察了三种孔结构的介质对模型蛋白的分离的效果和不同流速下介质的分离度差异,结果发现平均孔径为83.83 nm、14.22 nm、8.74 nm的介质都对模型蛋白有良好的分离效果,但平均孔径为83.83 nm的介质的分离度优于另外两种介质,且其随流速增加,其分离度下降最小。