间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多种功能,它能够参与免疫调节反应,抑制效应T细胞,促进调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)的增殖。禽类CD4~+CD25~+ T细胞具有与哺乳动物中Treg相似的功能,而禽类中关于外源MSCs与CD4-CD25~+ T细胞间的相互作用,迄今为止未有报道。嵌合体是研究外源细胞迁移和免疫耐受的良好模型,本研究利用北京鸭骨髓MSCs进行北京鸭-白来航鸡种间嵌合体模型的构建,观察供体MSCs在受体中的迁移情况及引起的嵌合体中CD4-CD25~+ T细胞的变化情况。MSCs来源广泛,禽类中不同来源MSCs间的比较研究目前未见报道。本研究对白来航鸡四种来源(骨髓、脂肪、脐带及脾脏)衍生MSCs的生物学特性进行比较,结果表明,四种来源衍生的MSCs在进行体外培养时细胞形态基本一致,细胞表面标记物的表达类型相同,即表达CD29、CD44、CD71、CD90及CD105,不表达CD31、CD34及CD45。荧光实时定量PCR检测发现,表面标记物的相对表达量有所不同,可能对不同来源MSCs的功能造成影响。细胞生长曲线与体外迁移比较发现,脾脏来源的MSCs具有比骨髓、脂肪、脐带来源的MSCs更低的生长速度和迁移能力,且MSCs的体外迁移能力与SDF-1/CXCR4相关。细胞体外分化实验发现,四种来源衍生的MSCs在体外都可以进行成骨和脂肪分化,但分化细胞相关标记物的相对表达量不同。骨髓来源MSCs易于成骨分化,脾脏来源MSCs易于脂肪分化,这可能是由于不同来源衍生的MSCs中相关基因的相对表达量不同引起的。在进行同源异体注射时发现,四种来源衍生的MSCs基本不引起体液免疫反应,体液免疫原性均较低。综合以上各种来源MSCs的性质与特点,骨髓来源MSCs具有最优异的综合性能,脂肪来源MSCs性能略差,但具有广阔的应用潜力,脾脏来源MSCs的应用潜力较小。参照上述方法,选用北京鸭骨髓来源MSCs(dBM-MSCs)进行北京鸭-白来航鸡嵌合体的制备。利用慢病毒感染和PKH26染色两种方法,分别对dBM-MSCs进行荧光标记,观察供体细胞在受体体内的迁移情况。结果发现dBM-MSCs能够迁移到多个组织器官中,且能够在体内存活。表明可以利用dBM-MSCs进行嵌合体的构建。通过GFP标记及PCR鉴定法,可以在嵌合体中发现供体来源的特异性基因,表明嵌合体构建成功。本研究中嵌合体的嵌合率约为17%。检测嵌合体中CD4~+CD25~+ T细胞变化发现,在1日龄的嵌合体中CD4~+CD25~+ T细胞从胸腺迁移到脾脏和盲肠扁桃体中,而不迁移到法氏囊中。CD4~+CD25-T细胞的迁移比例显著高于对照组,表明供体dBM-MSCs增强了 CD4~+CD25~+T细胞迁移。在对7日龄和30日龄的嵌合体进行检测时发现,嵌合体胸腺和脾脏中的CD4~+CD25~+T细胞比例与对照组相比基本相同,而盲肠扁桃体中的CD4~+CD25~+T细胞比例显著高于对照组,推测供体细胞更易迁移到盲肠扁桃体中;但盲肠扁桃体中的CD4~+CD25~+T细胞比例的差异程度随时间延长逐渐降低;细胞因子IL-10和TGF-β与CD4-CD25~+T细胞比例的变化结果相似,表明在嵌合体中IL-10和TGF-β的表达与CD4-CD25-T细胞比例变化可能具有相关性。综上所述,本研究比较了白来航鸡四种来源的MSCs间的差异,利用北京鸭骨髓来源MSCs作为制备嵌合体的供体细胞,成功制备北京鸭-白来航鸡种间嵌合体,为研究禽类MSCs对CD4~+CD25~+ T细胞的影响建立了动物模型;嵌合体中CD4~+CD25~+ T细胞比例的变化,结果表明外源MSCs可能增加了嵌合体中CD4~+CD25~+ T细胞的迁移比例,为利用MSCs进行相关疾病研究提供新的视角。