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本研究以《金匮要略》中经典名方酸枣仁汤为研究对象,对其有效部位进行了如下几方面的研究:考察了不同溶剂制备的酸枣仁汤对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠协同作用和阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响,确定水为最佳提取溶剂;用不同极性有机溶剂对酸枣仁汤进行萃取,通过阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠协同作用和阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间实验,考察不同萃取部位对酸枣仁汤水煎液药效的影响,初步确定正丁醇层和水煎醇沉后获得的多糖成分为酸枣仁汤的有效部位。首次建立了同时测定大鼠脑匀浆液中5-HT,5-HIAA,Glu,GABA,DA,NE,Ach,Try浓度的超高效液相-串联质谱联用(UFLC-MS/MS)方法。使用ODS-EP色谱柱,流动相为甲醇-0.01%乙酸水,梯度洗脱;流速1.2 ml/min;进样量5 μl。以异丙肾上腺素为内标,脑匀浆液经甲醇沉淀蛋白,离心后直接进样分析。待测物在各测定范围内线性关系良好,R2 ≥ 0.9915,待测物和内标的提取回收率均大于86.0%,方法的专属性、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。建立了同时测定大鼠血浆中5-HT,5-HIAA,Glu,GABA,DA,NE,Ach,Try浓度的UFLC-MS/MS方法。以异丙肾上腺素为内标,血浆经0.1%的甲酸甲醇溶液沉淀蛋白,取上清液,吹干,流动相复溶后进样20 μl。待测物在各测定范围内线性关系良好,R2≥ 0.9841,待测物和内标的提取回收率均大于83.0%,方法的专属性、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。采用所建立的测定大鼠脑匀浆液和血浆中5-HT,5-HIAA,Glu,GABA,DA,NE,Ach,Try浓度的UFLC-MS/MS方法,考察了酸枣仁汤和筛选出的酸枣仁汤有效部位对肝阴虚失眠模型大鼠的改善作用。设正常对照组、失眠模型组、肝阴虚模型组、肝阴虚-失眠模型组、给药组和阳性对照组(复方酸枣仁颗粒和地西泮片)。采用腹腔注射对氯苯丙氨酸和氢化可旳松分别制备失眠模型、肝阴虚模型和二者的复合模型。连续治疗9 d,定期测定各组大鼠体重,分别检测大鼠大脑和血浆中5-HT,5-HIAA,Glu,GABA,DA,NE,Ach,Try的含量,并测定血液中环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、三碘甲状腺原氨酸和甲状腺素的含量。结果表明,与肝阴虚-失眠模型组大鼠相比,各给药组大鼠脑内 5-HT,5-HIAA,Glu,DA,NE,Ach 和血液中 5-HT,5-HIAA,Try,cAMP,cGMP,T3,T4浓度均有不同程度恢复,证明各组药物对失眠均具有预防和治疗作用。其中,酸枣仁汤正丁醇提取物与多糖成分对治疗大鼠失眠与肝阴虚均有作用,其中正丁醇提取物治疗大鼠失眠效果良好,多糖成分能显著提高机体免疫能力,恢复大鼠体重。因此本研究确定正丁醇提取物与多糖成分为酸枣仁汤的有效部位。利用UFLC/MS/MS-QTrap高分辨质谱,对酸枣仁汤正丁醇萃取部位分别进行了分离分析。根据各个色谱峰一级质谱信息和二级质谱信息共鉴定出13个化合物,其中黄酮类6个:斯皮诺素、芒果苷、当药黄素、异当药黄素、甘草苷、甘草素;三萜类3个:齐墩果酸、白桦脂酸、土莫酸;内酯类2个:洋川芎内酯A、洋川芎内酯Ⅰ;酸类2个:阿魏酸、大黄酚。初步阐明了酸枣仁汤正丁醇萃取部分的主要化学物质基础,为其药效物质基础和质量控制方法的深入研究奠定基础。首次建立了同时测定大鼠血浆中斯皮诺素、芒果苷和阿魏酸浓度的UFLC-MS/MS方法。使用SHIM-PACKXR-ODS色谱柱,流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱;流速0.4 ml/min;进样量2 μl。以红景天苷为内标,血浆经异丙醇-乙酸乙酯(1:1,v/v)萃取,取上清液,吹干,流动相复溶后进样分析。斯皮诺素、芒果苷和阿魏酸分别在1.0～500.0,6.0～3000,1.0～500.0 ng/ml范围内线性关系良好(r ≥ 0.9908),定量下限分别为1.0,6.0,1.0 ng/ml。3个待测物和内标的提取回收率均大于87.0%,方法的专属性、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。采用所建立的方法测定了健康和肝阴虚失眠大鼠分别灌胃给予酸枣仁汤后斯皮诺素、芒果苷和阿魏酸的血浆浓度,考察了给药后3个待测物在大鼠体内的药动学行为。斯皮诺素的峰浓度Cmax分别为 164.1 ± 21.6 和 44.20 ± 13.63 ng/ml,曲线下面积 AUC(0-∞)分别为 509.8 ±35.7 和 203.2 ± 16.0 ng×h/ml,半衰期 T1/2 分别为 0.74±0.11 和 1.44± 0.61 h。芒果苷的峰浓度Cmax分别为2730 ± 236和1576 ± 323 ng/ml,曲线下面积AUC(0-0)分别为1.589×104± 0.355×104 和 1.OO0×104±0.133×104ng×h/ml,半衰期T1/2 分别为 0.39±0.04和 0.54 ±0.05 h。阿魏酸的峰浓度 Cmax分别为 152.3 ±48.4 和 151.5 ±54.5 ng/ml,曲线下面积 AUC(0-∞)分别为 331.2 ± 35.3 和 279.4 ± 39.4 ng×h/ml,半衰期 T1/2 分别为 2.48 ±1.52和2.98 ±1.54 h。结果表明:大鼠灌胃给予酸枣仁汤后,斯皮诺素与芒果苷在模型组大鼠体内药动学行为与健康组相比具有显著差异;而失眠大鼠体内阿魏酸各项参数与健康大鼠相比,均无显著性变化。