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研究目的:探讨血管交感神经的NO通路及对VSMC增殖的影响实验方法建模与实验分组:取雄性SD鼠30只,体重250克±20克,手术暴露右侧颈总动脉,在颈总动脉上放置一2×1㎜含有1μl 2.16mol/LFeCl3的滤纸,放置20min,建立平滑肌增殖模型。随机分为4组(1)模型存活1d组;(2)5d组;(3)LNNA组,建模前一天开始,两次腹腔注射LNNA15mg/﹙kg·d﹚,连续注射6天;(4)假手术组:在2×1㎜滤纸上加生理盐水1μl代替FeCl3。其中5d组12只动物,其它组6只,从5d组中取6只大鼠作FG逆行追踪,注射颈总动脉3只;注射颈上神经节3只。FG逆行追踪:SD大鼠10只,体重240克±20克,随机分成两组。大鼠仰卧位,沿颈部正中线剪开约3cm的切口,其中一组暴露右侧颈总动脉鞘,用连接微量注射器的玻璃微管往动脉外膜和中膜间缓慢注射1μl 1%FG,留针15分钟;另一组在右侧颈内动脉和颈外动脉的交叉处暴露颈上神经节,往颈上神经节内缓慢注射1μl 1%FG,留针15分钟。存活一周后灌注取材。NADPH-d酶组织化学染色:脊髓和神经节切片入NADPH-d酶液37℃孵育1h(孵育液含: 0.3% TritonX-100;0.1 g/L硝基四唑氮蓝(NBT);1.0g/Lβ-NADPH),切片移入0.01M PBS洗5min×3次,裱片,自然干燥,酒精梯度脱水,二甲苯透明,中性树脂封片;注射FG的NADPH-d酶组织化学染色切片用液体石蜡封片,荧光显微镜下观察。结果一、NO神经通路:颈上、中、下神经节都有FG标记细胞,但颈上神经节标记细胞多于颈中、下神经节;脊髓T1-T3节段中间外侧核有FG标记细胞,用注射FG的切片去染NADPH-d酶组织化学,结果显示颈上神经节和脊髓节段FG标记阳性的细胞均为NADPH-d阳性细胞,表明支配颈总动脉的颈上神经节含NO神经。二、NADPH阳性神经元的变化:在脊髓5d组NADPH阳性神经元比假手术组明显增多(P<0.05),1d组也有增多,但无显著差异(P>0.05);而用NOS抑制剂组中间外侧核的NADPH阳性神经元与5d组相比明显减少(P<0.05)。颈交感神经节正常情况下有少量NADPH表达,在损伤血管造成平滑肌增殖模型1d和5d组, NADPH细胞比假手术组有增多,特别5d组更明显(P<0.05),而NOS抑制剂组(LNNA)神经节中的NADPH阳性细胞比5d组明显减少(P<0.05)。三、平滑肌增殖变化:颈总动脉的HE染色表明,血管受损后一天平滑肌就开始增殖,5天增殖明显,这种变化趋势与在颈交感神经节和脊髓侧角NOS阳性神经元的增多变化是一致。用了NOS抑制剂组(LNNA)脊髓侧角和神经节中的NADPH细胞明显减少,而血管平滑肌增殖抑制剂组比没有用抑制剂的组更明显。结论1.颈总动脉的交感神经由颈交感神经节支配,其中以颈上神经节为主。2.支配颈总动脉的交感神经含NO递质,并支配颈神经节的T1-T3脊髓侧角也含NO神经元。3.支配颈总动脉的NO神经正常情况下呈低表达,当血管受损平滑肌增殖时呈高表达,提示血管NO神经参与了VSMC增殖的调控。