目的：　　 1.研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染人肺癌腺上皮细胞(A549)在三个不同时间点(12h、24h、48h)后调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)、分形趋化因子(FKN)、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）mRNA和蛋白水平的变化，探讨RSV感染后趋化因子表达的变化。　　 2.通过不同浓度过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和罗格列酮及PPARγ拮抗剂(GW9662)对RSV感染A549细胞的干预，研究不同时间点RANTES，FKN，IP-10mRNA表达和蛋白水平的变化，分析天然和合成PPARγ激动剂对RSV感染趋化因子表达的影响。　　 3.为临床应用PPARγ激动剂治疗RSV感染提供实验依据，为RSV感染的治疗及药物的研发提供新的途径。　　 方法：　　 1.建立体外模型:将传代培养的A549细胞铺于六孔板中，每孔加入相同剂量的F12K培养液培养过夜。将细胞随机分成5组:A组（15d-PGJ2+RSV组），B组（罗格列酮+RSV组）、C组（DMSO+RSV组）、D组（GW9662+罗格列酮+RSV组）、E组（细胞对照组）。A组、B组和C组先分别以10-20μmol/L的15d-PGJ2、10-30μmol/L的罗格列酮和0.01％(v/v) DMSO预处理0.5h，再加100半数组织培养感染量(TCID50)RSV吸附2h后加培养液37℃、5％CO2培养;D组先以10μmol/L的GW9662预处理0.5h，再加10μmol/L的罗格列酮作用2h后以100TCID50 RSV吸附2h，然后加培养液培养;E组未予处理在培养液中正常培养。各组分别在培养12h、24h、48h收获细胞及上清液待测。　　 2.应用ELISA检测各组上清液RANTES、FKN、IP-10蛋白水平，实时荧光定量RT-PCR检测各组RANTES、FKN、IP-10 mRNA表达。　　 结果：　　 1.病毒滴度的测定:本次实验RSV的TCID50通过Reed-Muench公式计算为10-5.6/50μl。造模采用的病毒攻击量为100TCID50，即10-3.6/50μl。　　 2.RSV感染后RANTES、FKN、IP-10蛋白水平和mRNA表达的变化与E组相比，C组RANTES、FKN、IP-10蛋白及mRNA表达在12h、24h和48h均明显升高（均P＜0.01）。其中RANTES、FKN、IP-10的蛋白表达量均在48h达高峰，与12h比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;而三种因子mRNA的表达量在24h达高峰，48h有所下降，与12h的表达量相近，差异无统计意义(均P＞0.05)。RANTES、FKN、IP-10蛋白和mRNA随时间的变化趋势基本一致。　　 3.PPARγ激动剂干预对RANTES蛋白和mRNA表达的影响:　　 在12h、24h、48h三个不同时间点上，不同浓度的15d-PGJ2和罗格列酮干预后，对RANTESmRNA和蛋白表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义(均P＜0.05)。在同一时间点上，不同浓度的15d-PGJ2和罗格列酮随着药物剂量的增加，RANTESmRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降，与C组相比，差异有显著统计学意义(均P＜0.05)，但仍高于E组，差异亦有统计学意义（均P＜0.05），其中20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后RANTES mRNA和蛋白的表达量最低。C组与D组相比，RANTES mRNA和蛋白表达量的差异无统计学意义（均P＞0.05）。　　 4.PPARγ激动剂干预对FKN蛋白和mRNA和表达的影响:　　 同一时间点，A组、B组与C组相比，随着药物剂量的增加，FKNmRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降(均P＜0.05)。其中20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后FKNmRNA和蛋白的表达量最低。但A组、B组与E组相比，仍明显升高，差异亦有统计学意义（均P＜0.05）。在三个不同时间点上，各个浓度的15d-PGJ2和罗格列酮对FKN mRNA和蛋白表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义（均P＜0.05）。C组与D组相比，FKNmRNA和蛋白表达量的差异无统计学意义(均P＞0.05)。　　 5.PPARγ激动剂干预对IP-10蛋白和mRNA和表达的影响:　　 各个浓度的15d-PGJ2和罗格列酮对IP-10mRNA和蛋白表达的抑制作用在12h最强，与24h及48h相比差异有统计学意义(均P＜0.05)。同一时间点，随着药物剂量的增加，A组和B组的IP-10mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降，其中20μmol/L15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后IP-10mRNA和蛋白的表达量最低，与C组相比差异有显著的统计学意义（均P＜0.05）;但仍高于E组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。C组与D组相比，IP-10mRNA和蛋白表达量的差异无统计学意义(均P＞0.05)。　　 结论：　　 1.RSV感染可导致趋化因子RANTES、FKN和IP-10mRNA水平及蛋白表达升高，表明RSV感染可上调趋化因子的表达，诱导炎症反应。　　 2.15d-PGJ2、罗格列酮均可降低RSV感染A549细胞中不同时间点RANTES、FKN和IP-10mRNA及蛋白的表达，而使用GW抑制剂之后，三种趋化因子的表达与RSV组的差异无统计学意义，表明PPARγ激动剂具有下调RSV感染趋化因子表达的作用。　　 3.15d-PGJ2和罗格列酮能以剂量依赖性方式抑制RSV感染后RANTES、FKN、IP-10蛋白和mRNA的表达，其最佳剂量分别为20μmol/L和30μmol/L，并且在12h作用最强。