目的调控微管以阻滞细胞周期和促进细胞凋亡是肿瘤治疗中的重要理论。白头翁汤是《伤寒杂病论》中的方剂。由白头翁、黄柏、黄连、秦皮四味药物组成,具有清热解毒、止痢凉血的功效。本课题采用分子生物学手段,从细胞增殖、周期阻滞、细胞凋亡等效应出发对白头翁汤的抗肺癌作用进行研究,以期明确白头翁汤抗肺癌的作用机制。方法1.应用CCK8法对12首经方进行筛选,根据抑制肺癌细胞增殖的效果,选择最优的抗肺癌方剂。2.采用H1975、A549肺腺癌细胞株建立体外培养体系,观察白头翁汤对肺腺癌细胞生物学行为的影响。采用SYBR GREEN、CCK8法、克隆形成、流式细胞术来检测不同浓度的白头翁汤对H1975、A549肺癌细胞增殖、克隆形成、细胞周期和细胞凋亡的影响,并用western blot检测白头翁汤对肺腺癌A549细胞M期相关蛋白如Cyclin B1以及凋亡相关蛋白如Caspase3等蛋白表达的影响。3.用免疫荧光法检测白头翁汤对肺腺癌细胞A549细胞微管蛋白聚合的影响。4.体内实验通过建立Lewis肺癌C57/BL6小鼠皮下移植瘤模型,将C57/BL6小鼠随机分为生理盐水组、白头翁汤低剂量组、白头翁汤中剂量组,白头翁汤高剂量组每组10只,分别给予生理盐水、白头翁汤低剂量、白头翁汤中剂量、白头翁汤高剂量灌胃,干预两周,每周测量2次体重和瘤体,评价白头翁汤对肺癌生长的影响。5.将ICR小鼠随机分为三组:生理盐水组、白头翁汤低剂量组、白头翁汤中剂量组,每组4只,每天灌胃一次,每三天称重一次,生理盐水组给予生理盐水灌胃,白头翁汤低、中剂量组分别给予白头翁汤灌胃,干预30天后眼球取血检测血常规、肝肾功能,评价白头翁汤的安全性。结果1.根据对肺腺癌细胞增殖抑制的效果,筛选出白头翁汤。其对肺腺癌细胞H1975、A549的IC50值分别为67μg/ml、38μg/ml。2.白头翁汤能抑制H1975肺腺癌细胞、A549肺腺癌细胞的增殖和克隆形成能力;可将肺腺癌H1975、A549细胞阻滞在G2/M期;促进肺腺癌细胞凋亡。3.白头翁汤可降低周期相关蛋白如Cyclin B1和凋亡相关蛋白如Caspase3等蛋白的表达。4.白头翁汤干预24h后,可影响A549肺癌细胞的微管聚合,细胞骨架明显皱缩。5.动物实验验证白头翁汤体内外给药均可以抑制C57/BL6小鼠皮下移植瘤的发展,并且药物无明显的毒副作用。结论白头翁汤可以通过调控细胞周期相关蛋白Cyclin B1、CDK1,阻止微管聚合,进而将肺腺癌细胞阻滞于M期;又可降低凋亡相关蛋白Caspase3、8、9和Bcl2的表达,促进肺腺癌细胞发生凋亡;同时也可抑制C57/BL6小鼠Lewis细胞皮下移植瘤的生长,并对正常ICR小鼠的体重、血常规、肝肾功能无显著影响。白头翁汤在肺癌治疗中的研究,为经方抗肺癌的研究提供思路,丰富了“老药新用”的科学内涵。