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酸枣仁是鼠李科植物酸枣(Ziziphous jujuba Mill.Var.Spinosa(Bunge)Hu.Et H.f.Chou)的干燥成熟种子,作为药食同源两用品。具有治疗心悸、失眠和多梦等功效,临床上常用于治疗体虚多汗、虚烦不眠、津伤口渴、惊悸多梦等症。酸枣仁在我国西北、东北及华北地区常见分布。酸枣仁中含有皂苷及三萜、黄酮、生物碱、脂肪酸和多糖等成分,但是目前关于酸枣仁的研究大都集中在黄酮、皂苷等化合物的研究,而关于多糖的研究报道少见。但是,目前关于植物多糖的相关研究越来越多,并且已有研究表明植物多糖在抗肿瘤、抗肝炎、调节糖代谢等方面表现出显著的生物活性,且毒副作用低,已经成为近年来药品、保健食品研究领域的热点之一。因此,酸枣仁多糖具有广阔的开发应用前景。本研究利用响应面法优化酸枣仁多糖的超声提取工艺及脱色工艺,进而采用多种分析技术对其理化性质及化学结构进行表征,并以小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为细胞模型探究酸枣仁多糖的免疫调节活性,初步探索该多糖在体内发挥免疫调节作用的作用机制。主要成果如下:(1)采用超声辅助热水浸提及响应面优化法优化酸枣仁多糖的提取工艺,实验结果表明酸枣仁多糖的超声辅助提取最佳提取工艺如下:提取温度52.5℃,超声时间21.2 min,超声功率134.9 W,液料比26.3 mL/g,此条件下酸枣仁多糖的最大得率为1.05%。(2)利用响应面法优化酸枣仁多糖的脱色工艺。结果表明:选用D101大孔吸附树脂,当上样质量浓度为2 mg/mL,上样量为3.5 mL,洗脱流速为4 BV/h时脱色效果最佳,此条件下多糖脱色率和多糖保留率分别为61.32%和87.05%,二者综合得出的归一值OD值为0.56(模型预测值0.55),说明该工艺可行性良好。(3)HPLC-ELSD测得该多糖主要包含两种分子量的多糖分别为10000 KDa及2.34 KDa。HPLC柱前衍生化法测得该多糖的主要单糖组成为葡萄糖醛酸(0.89±0.02%),甘露糖(15.42±0.08%),鼠李糖(18.36±0.05%),葡萄糖(0.20±0.02%),半乳糖(35.49±0.02%),木糖(29.33±0.05%)。红外光谱显示酸枣仁多糖在33003500 cm-1、28003000 cm-1、12001700 cm-1和6001100 cm-1波长范围内具有多糖的特征性吸收峰。核磁共振波谱(1H-NMR)显示H-1的化学位移大于4.9 ppm表明该多糖主要由α-吡喃糖组成,这与红外光谱分析结果一致。信号在0.81.5 ppm的范围内,表明该多糖有多种不同的糖苷键相连接。此外,1.82.2ppm的信号表明,多糖中可能含有一些乙酰基。(4)MTT实验表明,酸枣仁多糖作用于RAW264.7细胞12 h后,低浓度(5μg/mL)的酸枣仁多糖可以显著促进RAW264.7细胞的增殖。Griess实验和Western Blot实验表明,不同浓度的酸枣仁多糖作用RAW264.7细胞12 h后,该多糖可以显著促进RAW264.7细胞中NO释放和压力反应蛋白(COX-2和iNOS)表达量的增加,且具有一定的剂量依赖性。另外,酸枣仁多糖作用于RAW264.7细胞后,能够显著促进IκB-α和ERK蛋白的磷酸化水平,以上实验结果表明,酸枣仁多糖具有一定的免疫调节作用。