论文部分内容阅读
第一部分小分子化合物As2S2对白血病细胞的杀伤效应及其作用机制的研究目的观察As2S2对白血病细胞的杀伤效应，揭示其杀伤机制，探索联用PI3K抑制剂PI-103时二者对白血病细胞的治疗获益。方法以不同浓度的As2S2作用白血病细胞不同时间后，应用MTT试验检测As2S2对白血病细胞的增殖抑制；流式细胞术及MGG染色检测As2S2及PI-103单用或联用时对白血病细胞、脐血单个核细胞及白血病患者骨髓单个核细胞的分化及凋亡诱导作用；克隆形成实验检测As2S2对白血病细胞克隆的清除能力；细胞免疫荧光、Western blot、Real-time PCR及Real-timePCR array检测As2S2对PML和PI3K信号通路中多个信号分子的蛋白及转录水平的调控。结果As2S2以时间、剂量依赖性方式抑制白血病细胞增殖、诱导其凋亡，抑制白血病细胞的克隆形成能力。As2S2作用后，PML蛋白的表达被显著下调，但转录水平无明显变化。PI3K信号通路中关键蛋白磷酸化水平短时间内被激活，随着作用时间的延长则转为下调，该通路基因变化的总体趋势是被下调。As2S2和PI-103联用对白血病细胞的凋亡诱导起到了协同增强的效应，但对正常的单个核细胞无明显的毒副作用。结论As2S2可能通过降调PML蛋白表达、长时间作用后抑制PI3K信号通路对白血病细胞显示出的时间、剂量依赖性杀伤效应，PI-103可协同增强上述效应，但对正常的单个核细胞无明显的毒副作用，具有较高的治疗指数。第二部分小分子化合物As2S2对白血病干细胞的杀伤效应及其作用机制的初步研究目的检测小分子化合物As2S2单用或联用PI-103时对白血病干细胞的杀伤效应，初步研究其作用机制。方法应用流式细胞术分选白血病干细胞；经As2S2及PI-103单独或联合处理后，流式细胞术检测各组白血病干细胞的凋亡和分化；克隆形成实验检测药物干预后白血病干细胞及正常造血干细胞克隆形成能力的变化；多色流式细胞仪检测As2S2作用后白血病干细胞内p-AKT473表达的动态变化。结果流式细胞术分选的CD34+CD38-细胞占患者骨髓细胞总数的75．4％，分选纯度为96．4％。anti-ki67-Hoechst染色分析表明G0期细胞占83．9％，G1细胞期占7．93％。500 nmol／L的As2S2和1μmol／L PI-103分别单独作用时，细胞凋亡诱导效应并不明显，而两者联用时，凋亡率则从17．26％跃升至31．02％。As2S2和PI-103均有一定程度的白血病细胞克隆清除能力，二者联用时对白血病细胞克隆的清除能力显著增强。在有效清除白血病克隆的药物浓度范围内，二者对正常造血干细胞的克隆形成能力无明显影响。流式细胞术检测显示，As2S2处理组细胞CD11b表达升高，PI-103处理组CD11b表达无明显变化，As2S2与PI-103联用组较As2S2处理组CD11b表达升高更明显。6例白血病标本中，CD34+CD38-Lin-的细胞群体内p-AKT473的表达在As2S2作用细胞1 b时上调，在24h时下调。结论As2S2能有效诱导白血病干细胞的凋亡，促进其分化，抑制其自我更新及增殖能力，PI-103可协同增强上述效应。