【摘 要】
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目的:对柿树寄生(persimmon parasitism,PP)的抗急性肝损伤作用进行研究,筛选其活性部位,并初步研究柿树寄生抗炎活性部位分别在四氯化碳和对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤小鼠模型的抗炎作用机制。方法:(1)取柿树寄生经80%乙醇回流提取后减压浓缩,再用石油醚溶液、氯仿溶液、乙酸乙酯溶液、正丁醇溶液分别萃取,得柿树寄生石油醚提取物、柿树寄生乙酸乙酯提取物、柿树寄生正丁醇提取物。(2)四氯
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目的:对柿树寄生(persimmon parasitism,PP)的抗急性肝损伤作用进行研究,筛选其活性部位,并初步研究柿树寄生抗炎活性部位分别在四氯化碳和对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤小鼠模型的抗炎作用机制。方法:(1)取柿树寄生经80%乙醇回流提取后减压浓缩,再用石油醚溶液、氯仿溶液、乙酸乙酯溶液、正丁醇溶液分别萃取,得柿树寄生石油醚提取物、柿树寄生乙酸乙酯提取物、柿树寄生正丁醇提取物。(2)四氯化碳(CC14)模型建立:将60只昆明种小鼠随机分成正常组、四氯化碳(CC14)模型组、联苯双酯阳性组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,灌胃给药8天后,腹腔注射CC14花生油溶液。检测血清中ALT和AST活性水平,肝匀浆检测氧化应激指标以及肝脏病理变化,用免疫组织化学技术检测和酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量及活性,用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测 IL-1β、JNK-MAPK、P38-MAPK、TNF-α的基因和蛋白表达。(3)将60只小鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,灌胃给药8天后,腹腔注射265mg·kg-1对乙酰氨基酚,建立急性肝损伤模型,常规检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性水平、肝匀浆生化指标,观察肝组织病理变化情况,用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β的含量水平。结果:(1)柿树寄生正丁醇萃取物(n-butanol extract from persimmon parasitism;NEPP)能显著降低ALT、AST活性水平(P<0.05),降低丙二醛(MDA)活力水平(P<0.05),显著提高超氧化物歧化酶(SOD)的水平(P<0.05),改善肝组织病理学变化。(2)NEPP能显著降低AST、ALT活性水平,减少 TGF-β1、TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平(P<0.05),IL-1β、JNK-MAPK、P38-MAPK、TNF-α的基因和蛋白表达显著降低(P<0.05),有效改善肝组织病理变化。(3)与模型组相比,NEPP能明显降低AST、ALT活性水平,降低TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平(P<0.05),降低MDA活力水平(P<0.05),显著提高SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、提高微量还原型谷胱甘肽(GSH)的水平(P<0.05),改善肝组织病理学变化。结论:(1)柿树寄生活性部位为柿树寄生正丁醇萃取物。(2)NEPP明显减轻CC14所致的肝损伤,其机制与抑制炎症因子表达,提高机体抗氧化能力,降低氧化应激,抑制MAPK信号通路基因表达有关。(3)NEPP能明显减轻APAP所致的肝损伤,其机制与降低炎症因子水平,提高机体抗氧化能力,降低氧化应激有关。
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