绵羔羊JIVET技术相关影响因素的研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:genius0728
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
幼畜胚胎体外生产技术(JIVET)是集幼畜超数排卵,卵母细胞的体外成熟和体外受精,胚胎体外培养和胚胎移植技术为一体的生物高新技术体系。本研究就羔羊卵母细胞体外培养体系优化,品种对羔羊超数排卵和卵母细胞发育能力的影响以及羔羊和成年羊卵母细胞核质成熟比较、囊胚细胞数量比较。为建立高效的幼畜胚胎体外生产技术体系进行理论探索研究。  实验一,研究了在成熟液中添加不同浓度的EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞发育能力的影响及其和成年羊卵母细胞体外发育的不同。并将体外受精胚胎进行了移植,为研究利用绵羊羔羊卵母细胞生产后代提供理论和技术方法。研究结果表明,添加不同浓度的EGF对哈萨克羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率影响不显著(P>0.05)。成熟液中添加100μMβ-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞囊胚率(P<0.05),但对卵裂率影响不显著(P>0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P<0.05)。添加100μMβ-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P<0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P>0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P<0.05),而添加100μMβ-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P>0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P>0.05)。实验结果表明,β-巯基乙醇能提高哈萨克羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精比例并减少多精子受精的发生。但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。哈萨克羔羊卵母细胞体外成熟、受精和发育获得的2-8细胞胚胎进行输卵管移植,14只受体羊中7只妊娠,妊娠率为50.0%;共产羔9只,其中8只存活。  实验二,比较羔羊和成年羊卵母细胞核成熟和质成熟,研究两种卵母细胞间的差异。实验分别对羔羊和成年羊体外成熟培养0、6、12、18和24h的卵母细胞取样后对α微管蛋白和染色体进行免疫细胞化学染色,以研究羔羊和成年羊卵母细胞核成熟的差异;分别对羔羊和成年羊体外成熟培养12和24h的卵母细胞取样后进行皮质颗粒染色,以比较羔羊和卵母细胞质成熟情况。结果表明,羔羊和成年羊卵母细胞在0h和6h时大部分处于GV和GVBD期。0h时羔羊卵母细胞处于GVBD期的卵母细胞比例显著低于成年羊(P<0.05)。12h时羔羊卵母细胞处于GV、GVBD和MI期,而成年羊卵母细胞主要处于MI期,且羔羊卵母细胞处于MI期的比例显著低于成年羊(P<0.05)。18h时羔羊和成年羊卵母细胞主要处于AI-TI期。24h时羔羊和成年羊卵母细胞主要处于MⅡ期(即核成熟),羔羊卵母细胞核成熟率显著低于成年羊(P<0.05)。成年羊卵母细胞成熟12h时有部分皮质颗粒已经迁移到质膜下,而羔羊卵母细胞皮质颗粒仍均匀分布。成年羊卵母细胞成熟24h时皮质颗粒迁移至质膜下,羔羊卵母细胞皮质颗粒没有完全迁移到质膜下,仍有大量在胞质中。说明羔羊卵母细胞核成熟和质成熟能力低于成年羊。  实验三,探讨品种对羔羊超数排卵效果和卵母细胞发育能力的影响。实验对4-8周龄不同品种羔羊用FSH+PSMG处理后获得的平均卵母细胞数量和体外胚胎卵裂率和囊胚率进行了比较。各品种获得的平均卵母细胞数分别为:哈萨克为210.22枚,湖羊为0枚,美利奴为135.80枚,湖羊与哈萨克的杂交后代为37.80枚。湖羊羔羊和湖羊与哈萨克羊的杂交羔羊获得的平均卵母细胞数显著低于哈萨克羔羊(P<0.05)。哈萨克羔羊、湖羊羔羊与哈萨克羊杂交羔羊和美利奴羔羊间卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05)。
其他文献
精液与雄性生殖疾病密切相关,近年来,蛋白质组学的出现为精液研究提供了新的有效的研究方法。迄今为止,蛋白质组学已运用在人、鼠等多种动物的精液研究中,促进了精子发生分子