以卟啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whitesharke
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文从利用毛细管电泳定量微量蛋白质的角度出发,主要研究了利用水溶性卟啉——meso-四(4-磺基苯)卟啉 (TPPS4)作为光谱探针,在毛细管电泳上定量微量蛋白质的方法,并探讨了两种卟啉作为蛋白质标记物应用于毛细管电泳免疫分析的可能性。本文研究了meso-四(4-磺基苯)卟啉染色测定蛋白质的复合反应,讨论了蛋白质浓度与TPPS4溶液在435nm处光谱吸收值的线性关系。考察了反应温度及时间、缓冲溶液酸度、TPPS4浓度对定量关系的影响,并探讨了非蛋白物质的干扰和采用不同蛋白作标准工作曲线时各种蛋白质的响应。优化了光谱分析中用TPPS4作为探针定量微量蛋白的条件。在光谱分析的基础上,研究了毛细管电泳技术定量微量蛋白质的方法。考察了复合物形成后改变溶液酸度对复合物稳定性的影响,优化毛细管电泳分析TPPS4的条件,并引入(-环糊精作为电泳缓冲添加剂进一步优化TPPS4的电泳行为。最后以BSA作为标准蛋白质,建立标准曲线,对人血清中蛋白质总量进行测定。本论文所建立的毛细管电泳定量分析蛋白质的方法,在未使用荧光检测器或增加毛细管光程的情况下,比毛细管电泳蛋白质直接进样、紫外检测的灵敏度提高了2个数量级。与毛细管电泳测定微量蛋白的常用方法——荧光衍生后利用激光诱导荧光检测相比,方法操作简单,试剂稳定并降低了仪器的成本。 最后考察了TPPS4 和氯化血红素(hemin) 作为标记物应用于免疫分析和毛细管电泳免疫分析的可行性。讨论了TPPS4和hemin与蛋白质的结合方法和游离标记物的去除,测定了TPPS4-BSA结合率和TPPS4与BSA结合后对蛋白免疫活性的影响。讨论中发现,所研究的卟啉类高灵敏度染色剂与抗原蛋白结合后,在毛细管电泳可见光检测的分析并不比非标记蛋白在毛细管电泳紫外检测分析中更为灵敏。实验结果为进一步探讨两种卟啉化合物作为荧光标记物的可能性打下了基础。
其他文献
鸟苷酰环化酶(guanylyl cyclase,GC)-C在正常组织中,分布于肠黏膜细胞绒毛的顶端,不在肠外组织中表达,在细胞发生化生、恶变、肿瘤转移、体外培养等改变时,这种表达持续存在
以某综合医院为例,对室内外消火栓系统的设计措施进行了研究,并论述了工程设计中的疑难点,结合相关设计规范,提出了设计中需注意的一些关键事项,以保证消火栓系统设计的合理
大功率激光二极管的出现及其迅猛发展,为研究新的激光晶体提供了条件。本论文介绍了激光晶体研究的趋势以及稀土激光晶体的研究进展。对Nd:GdVO4晶体掺杂Ca2+离子以改善其拉
随着近年我国对集体林权制度和林下经济政策的改革,林下经济得到迅速发展,并且在生态建设和林地利用等方面发挥了重要作用。土壤是植被赖以生存的物质基础,植物通过根系与土
培养学生学习兴趣,对调动学生学习的积极性和主动性,提高教学质量,都有着非常重要的意义。文学泰斗托尔斯泰说过:"成功的教学所需的不是强制,而是激发学生的兴趣。"兴趣是获
个别城市的出租车罢运事件折射出了经营管理体制的弊端,对此应当引起高度重视。除了要解决出租车公司在管理与收费等方面存在的问题外,还要考虑放开出租车经营主体的限制,不
《普通高中化学课程标准(实验)》将“物质的量及其相关内容”归入“认识化学科学”这一主题中,要求学生“认识摩尔是物质的量的基本单位,能用于进行简单的化学计算,体会定量
目的分析老年高血压患者在自愿签约“1+1+1”服务模式前后的管理效果,以此推进基于社区的血压有效控制。方法对社区内110例老年高血压患者实施“1+1+1”签约管理半年后,观察
以中国学习者英语语料库(CLEC)为基础,对中国学习者可及性指示语的掌握情况进行了分析和研究。结果表明,不同水平的写作者在指示词频和指示词频数比例方面都非常接近。不同水
小儿病毒性肺炎多见于6个月~3岁婴幼儿,冬春季节多发,发病机制是病毒对肺的直接侵害,引起间质性炎症,而非变态反应所致,患儿死亡率较高,病情较重、较急。我科对58例小儿病毒性肺炎患