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肿瘤对人类健康构成极大威胁,肿瘤治疗以手术、化疗、放疗为主。近年来以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗、放疗治疗肿瘤的新模式。肿瘤的发生、发展与机体的免疫监视机能密切相关。近年来研究发现,人体内有一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群-CD4~+CD25~+调节性T细胞,可控制外周自身免疫反应,导致机体对肿瘤的免疫耐受。这类细胞具有免疫抑制及免疫无能等特性。CD4~+CD25~+调节性T细胞在体外发挥免疫抑制作用时没有MHC限制性,一旦被激活,其抑制活性是非特异的,可能通过细胞直接接触,细胞因子分泌等作用机制抑制CD4~+和CD8~+等T细胞的活化和增殖。课题将通过检测CD4~+CD25~+调节性T细胞在食管癌局部及全身的分布状况,进一步分析与临床病理的关系,探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞在食管癌发展及预后中的作用机制,旨在为食管癌的生物治疗提供新的切入点。第一部分食管癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测及意义研究目的通过检测食管癌患者外周血、肿瘤组织CD4~+CD25~+调节性T细胞水平的变化,及其与临床病理的关系,探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用机制。方法应用流式细胞仪检测食管癌患者外周血、肿瘤组织的CD4~+CD25~+调节性T细胞比例。37例食管癌患者外周血经淋巴细胞分离液分离单个核细胞;术中无菌切除食管癌组织20例,采用酶消化法分离肿瘤浸润淋巴细胞。经鼠抗人CD3、鼠抗人CD4、鼠抗人CD25抗体标记后应用流式细胞仪分析CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T淋巴细胞的比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4~+CD25~+调节性T细胞的分布变化。结果1.37例食管癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T淋巴细胞的比例为(12.31±3.58)%,20例食管癌局部组织CD~4+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T淋巴细胞的比例为(13.81±2.68)%,均显著高于同期健康对照组外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞所占比例(5.92±1.66)%,差异具有统计学意义(P均＜0.01)。2.37例食管癌患者中鳞癌32例,腺癌5例,两种不同病理类型食管癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞分别为(12.55±3.70)%、(10.76±2.35)%,较正常健康对照组CD4~+CD25~+调节性T细胞显著升高(P＜0.01),但两种病理类型之间差异无统计学意义(P＞0.05)。3.在不同分期的食管癌患者中,4例Ⅰ期、20例Ⅱ期、13例Ⅲ期食管癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的比例逐渐增高,分别为(11.10±2.56)%、(12.55±3.67)%、(14.32±3.85)%,三组患者CD4~+CD25~+调节性T细胞比例随分期增高呈上升趋势,经方差分析,三组比例差异显著(P＜0.01)。4.37例食管癌手术患者中,淋巴结转移组外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞比例为(13.44±3.72)%,淋巴结未转移组CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞比例为(10.83±2.85)%,两组差异具有统计学意义(P＜0.05)。5.食管癌患者CD4~+CD25~+调节性T细胞表达占CD4~+T细胞比例在不同年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度间差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论食管癌患者外周血及肿瘤局部组织CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4+T细胞比例增高,显著高于同期健康对照组。CD4~+CD25~+调节性T细胞增高比例与TNM分期、淋巴结是否转移有关。食管癌患者外周血及肿瘤局部CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞比例均增高,提示食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常。推测CD4~+CD25~+调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展。第二部分食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞表达与术后生存率的关系研究目的通过检测CD4~+CD25~+调节性T细胞特征性标志FOXP3在食管癌肿瘤组织中的表达,分析CD4~+CD25~+调节性T细胞在食管癌肿瘤组织中的浸润情况,进一步探讨FOXP3的表达情况与食管癌患者术后生存期的关系,间接预测CD4~+CD25~+调节性T细胞对食管癌患者预后的影响。方法采用免疫组织化学技术测定60例食管癌组织切片的CD4~+CD25~+调节性T细胞的特异性表面标志—FOXP3的表达,并以Kaplan-Meier法估计FOXP3过表达与非过表达食管癌患者的术后生存率,并绘制出生存率曲线,运用Log-rank检验加以比较。结果1.60例手术切除的食管癌组织中,FOXP3过表达29例,非过表达31例,过表达率为48.33%,FOXP3的过表达率在不同性别、年龄、病理类型、分化程度、肿瘤部位、肿瘤浸润深度间差异无统计学意义(P均＞0.05)。2.CD4~+CD25~+调节性T细胞的特异性标志FOXP3在肿瘤组织的过表达率与淋巴结转移状态及临床分期有关。淋巴结转移患者与未转移患者FOXP3过表达率分别为67.65%、23.08%,经卡方检验,差异显著(P＜0.01);不同TNM分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期食管癌患者肿瘤组织FOXP3的过表达率逐渐增高,经Fisher确切概率法检验,X~2为14.120,差异显著(P＜0.01);FOXP3过表达者预后较非过表达者差,5年生存率分别为10.34%,22.58%,经Log-rank检验X~2=5.05,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论运用免疫组织化学方法,通过对CD4~+CD25~+调节性T细胞的特征性标志—FOXP3的检测及其与临床病例资料的分析,初步推测CD4~+CD25~+调节性T细胞对判断食管癌患者预后有一定的参考价值,但是能否作为判断预后的一个独立的指标还有待进一步研究。