鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）引起的急性、高度传染性的呼吸道传染病;H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）是家禽中流行较广的低致病性病原,两种病原均广泛存在于鸡群中,均可通过呼吸道传播,这为两种病原发生混合感染协同致病提供可能。关于IBV和H9N2亚型AIV混合感染的研究已有报道,但现有研究未能清楚解释IBV与H9N2亚型AIV在感染过程中相互作用的关系及其协同致病机制。因此,本研究旨在通过两种病毒同时和先后顺序共感染SPF鸡、SPF鸡胚,探索IBV和H9N2亚型AIV不同时间顺序共感染与协同致病力之间的关系,并分析协同致病机制。主要研究内容如下:1.参照Gen Bank上公布的已有毒株序列设计IBV-N和H9N2-M基因q PCR引物,并参照文献中的引物对IBV-N和H9N2亚型AIV-M基因进行RT-PCR扩增,将扩增产物连接到p MD19-T载体上,获取标准质粒,通过q PCR方法成功地建立IBV-N和H9N2-M标准曲线,从而建立IBV和H9N2实验毒株绝对定量的检测方法。2.105只SPF鸡,随机分成6组,IBV-H9N2亚型AIV顺序感染组（I-H）,H9N2亚型AIV-IBV顺序感染组（H-I）,IBV+H9N2亚型AIV同时感染组（I+H）,IBV感染组,H9N2亚型AIV感染组（各19只）和对照组（10只）,攻毒后进行动物临床症状和病理变化观察,利用RT-q PCR分别检测IBV和H9N2亚型AIV在各组动物的组织分布情况、排毒情况,对攻毒14 d后动物免疫器官指数和HI抗体滴度进行分析。结果表明I-H攻毒组发病率为70%,死亡率为20%,均高于其他各组,I-H组和I+H组鸡排毒水平和脏器病毒载量高于其余组;I-H组和I+H组的免疫器官（胸腺和法氏囊）指数在攻毒14 d后显著低于IBV和H9N2亚型AIV单独感染组;I-H组和I+H组血清中H9N2的HI抗体滴度在攻毒14 d后显著低于H-I组;I-H组和I+H组病理损伤更严重;综上所述,先感染IBV,后感染H9N2亚型AIV组中SPF鸡发病最严重。3.对动物试验的组织样品中炎性细胞因子进行q PCR检测,对炎症相关蛋白IL-1β,NLRP3分别进行ELISA和WB检测;结果显示,I-H组MDA5和TLR7的m RNA表达量,I-H组和I+H组的天然免疫相关因子IFNβ、IFNα、IRF7、IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-18、NLRP3和Caspase1的m RNA表达量在气管、肾、肺、法氏囊和胸腺中均显著高于单独感染组,相对高于H-I组;I-H组和I+H组组织中的IL-1β蛋白和NLRP3蛋白含量显著高于单独感染组,相对高于H-I组;表明I-H组的炎性因子表达量更高。4.IBV和H9N2亚型AIV混合感染SPF鸡胚试验,分别以101EID50、103 EID50、105 EID50不同剂量、不同的感染顺序（先后和同时）混合感染SPF鸡胚,结果显示,先感染IBV,12 h或24 h后再感染H9N2亚型AIV,IBV滴度要显著高于IBV单独感染组,表明后感染12 h和24 h的H9N2亚型AIV可以促进IBV的复制。综上所述,本研究利用两种病毒同时和先后顺序共感染SPF鸡和SPF鸡胚,结果表明IBV-H9N2亚型AIV先后顺序感染显著提高了死亡率,发病率,排毒量、脏器带毒量,IBV先感染为H9N2的感染创造条件,后感染H9N2亚型AIV可促进IBV复制,引起了更强烈的炎症因子表达和更严重的组织损伤,导致了更严重的发病。本论文为进一步研究这两种病毒共感染协同致病机制奠定了一定基础,也为临床上IBV和H9N2亚型AIV混合感染疫病防控提供了科学依据。