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本文研究目的:观察豆根管食通口服液体外对Eca-109细胞毒性及端粒酶活性的影响,从细胞分子水平探讨该药的作用机制。
研究方法:实验选择人Eca-109细胞株,采用MTT分析法,测定不同浓度豆根管食通口服液单用及与氟脲嘧啶(5-FU)合用对Eca-109细胞的直接细胞毒作用;采用端粒重复序列扩增法(TRAP)、酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测了端粒酶的活性变化。
研究结果:
1、豆根管食通口服液对Eca-109细胞的细胞毒作用MTT结果显示对Eca-109细胞的生长有明显的抑制作用,各实验组与正常对照组OD值的差异有统计学意义,且在一定的浓度范围内存在剂量依赖性。①单用豆根管食通各浓度组、联合用药组以及单用5-Fu均有明显的抑瘤作用;②单用豆根管食通100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml组抑瘤率优于单用5-Fu组,P<0.05;但单用豆根管食通25mg/ml、50mg/ml组不优于单用5-Fu组P>0.05;③50mg/ml豆根管食通联合25μg/ml5-Fu组不优于25mg/ml豆根管食通联合25μg/ml5-Fu组,P>0.05。
2、豆根管食通口服液对Eca-109细胞端粒酶活性的影响采用TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,以波长450nm和630nm处的吸光度差值△A代表端粒酶活性。阴性对照组△A为0.02±0.003,阳性对照组△A为1.72±0.06。用2、1、0.5倍IC50分别处理Eca-109细胞12h后,△A分别为1.14±0.31、1.36±0.26、1.52±0.35;经t检验,0.5倍的IC50豆根管食通口服液与端粒酶阳性对照组无显著性差别,1倍及2倍的IC50豆根管食通口服液与对照组相比则存在非常显著性差别;24h至72h各实验组和端粒酶阳性对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01);随着药物作用时间的延长(12h-48h),端粒酶活性表达呈现线性下降趋势,统计结果表明P<0.01,说明存在着时效关系,而到了72h则这种时效关系不复存在;3个剂量中药培养食管癌Eca-109细胞至相同时间段,其端粒酶活性表达显示出一定的量效关系,在05倍至2倍IC50之间,呈现出正相关。
研究结论:
1、豆根管食通口服液在体外具有明显抑制Eca-109细胞的作用,与药物浓度呈正相关;
2、在一定的浓度范围内豆根管食通口服液可下调Eca-109细胞的端粒酶活性;
3、抑制端粒酶活性可能是豆根管食通口服液的抗癌机制之一。