【摘 要】
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胶原蛋白是动物细胞外基质的重要组成部分,约占哺乳动物总蛋白的1/3。大量研究表明许多疾病与胶原蛋白的类型、含量、分布、代谢及其动态变化异常有关,建立快速、准确的胶原蛋白
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胶原蛋白是动物细胞外基质的重要组成部分,约占哺乳动物总蛋白的1/3。大量研究表明许多疾病与胶原蛋白的类型、含量、分布、代谢及其动态变化异常有关,建立快速、准确的胶原蛋白检测方法不仅有利于疾病的早期诊断,而且有助于认识致病机理。本论文在胶原蛋白热变性、酶法降解的基础上,利用液相色谱/质谱联用技术通过特征多肽研究大鼠皮肤中不同类型胶原蛋白的相对含量及其动态变化。实验使用酶法从大鼠尾皮肤中提取了胶原蛋白粗品,柱前衍生化RP-HPLC法分析结果表明粗品中甘氨酸含量约为31.5%,羟脯氨酸>10%,脯氨酸>14%,证明提取物中主要为胶原蛋白;利用紫外分光光度法通过测定胶原蛋白溶解度随温度的变化,确定了胶原蛋白在1M NaCl,pH 8.0的0.05MTris-HCl缓冲液中的最适变性条件为50℃水浴中加热3小时;在此基础上对不同年龄的大鼠尾皮肤胶原蛋白粗品进行了变性,电泳分析结果热变性的胶原可溶于水溶液且热变性导致的随机降解较低;实验使用胰蛋白酶对变性胶原蛋白进行了降解,使用液相色谱/质谱联用技术对酶解产物进行了分析,证明降解物中含有特征多肽并可作为胶原蛋白的类型别的依据,并根据特征肽段研究了大鼠皮肤中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量随年龄的相对变化趋势。结果表明在大鼠生长过程中其皮肤中胶原蛋白的含量逐渐升高而Ⅲ型胶原蛋白的含量逐渐降低。本课题研究结果表明使用高效液相色谱/质谱联用技术分析组织中的胶原蛋白类型及其动态变化具有可行性,为更好的临床应用提供了实验基础。
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