背景:高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,Hv KP)是最近几年在临床分离率越来越多的菌株,因其菌落形态呈现高黏液表型,很多学者将肺炎克雷伯菌的菌落呈现该高黏液表型作为高毒力肺炎克雷伯菌的重要标志。值得关注的是,在临床抗感染工作中,进入患者体内的血药浓度因受到很多因素的影响(给药方式、给药剂量、给药途径等),使菌株常常处于亚抑菌抗生素浓度的作用下,进而会影响细菌的生命活动,改变其病原学行为,但目前较多的研究主要集中在亚抑菌浓度抗生素对肺炎克雷伯菌生物膜形成以及耐药性的影响,对高毒力肺炎克雷伯菌处于亚抑菌浓度抗生素作用下,毒力基因变化研究较少,因此本课题着重于这一点进行研究探讨。目的:研究在亚抑菌浓度抗生素作用下,高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因表达水平的变化,同时对菌株的荚膜血清型、相关毒力基因,菌株之间的同源性进行分析。方法:采用纸片扩散法、vitek2-compact仪器法测定菌株对临床常用抗菌药物的敏感性,并用微量肉汤稀释法检测菌株对头孢西丁和阿米卡星的MIC值。聚合酶链式反应(PCR)对荚膜血清型(K1,K2,K5,K20,K54,K57)及毒力相关基因(rmp A,aerobactin,Kfu,all S,mag A,wca G,fim H,mrk D)进行检测。运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测1/2MIC,1/4MIC,1/8MIC浓度头孢西丁、阿米卡星对菌株处理后毒力基因相对表达量的改变并用SPSS软件对其差异进行比较分析,通过基质辅助激光解吸电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)及ERIC-PCR检测菌株之间的同源性。结果:共收集57株高毒力肺炎克雷伯菌,对大多数临床常用抗生素保持敏感,PCR结果显示K1型有17株,K2型21株,K20型2株,K57型8株,有9株未检出血清型。rmp A、aerobactin基因检测全部阳性,wca G、Kfu、mag A三个基因分别检出17株、21株、16株。fim H、mrk D全部阳性。亚抑菌浓度头孢西丁及阿米卡星作用下,与对照组相比,三种浓度(1/2MIC,1/4MIC,1/8MIC)的两个抗生素对两种毒力基因均有明显的抑制作用(P<0.05),头孢西丁的抑制程度最高。三种浓度抗生素对细菌的抑制程度相比,以1/2MIC抗生素抑制效果最强。ERIC-PCR将57株菌株分为19型,用A-S来表示,MALDI-TOF MS按照蛋白图谱相似性≥70%标准将57株菌株分为3型,用Ⅰ-Ⅲ来表示,两者结果一致,显示菌株之间亲缘关系较远,其结果具有普遍意义。结论:高毒力肺炎克雷伯菌对临床常用抗生素有较高的敏感性,血清型K1,K2是高毒力肺炎克雷伯菌的常见血清型,在亚抑菌浓度头孢西丁,阿米卡星作用下,rmp A、aerobactin毒力基因表达下降。