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氯霉素（Chloramphenicol，CAP）又名左旋氯霉素、左霉素、氯胺苯醇，是一种相对便宜的，高度有效的广谱抑菌性抗生素。但是，氯霉素含有毒性，氯霉素药物的滥用，会对人和动物体产生毒副作用，造成母畜的流产、早产，致使牲畜的生育能力降低、产仔数量减少等。氯霉素还会使人体产生多种疾病，如视神经炎、灰色综合症、肝损伤、血液疾病等，氯霉素甚至能直接导致人和动物体的死亡。目前，氯霉素的检测主要有微生物法、酶联免疫吸附法（ELISA）、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。微生物法特异性差、灵敏度低、所需时间长。液相色谱-质谱联用法和气相色谱-质谱联用法能在抗生素低残留水平上对氯霉素进行检测，并且特异性强，但是所用仪器昂贵、样品预处理时间长。ELISA方法灵敏度高、特异性强、所需时间短、能够同时检测大量的样品，也不需要昂贵的仪器，适合基层实验人员进行大量样品的检测。本实验即是使用ELISA方法对氯霉素残留物进行检测。本实验使用重氮化法针对氯霉素所含有的硝基，选用牛血清白蛋白和卵清白蛋白作为载体蛋白，对氯霉素小分子进行偶联。偶联完成后用SDS-PAGE电泳法、紫外分光光谱法、红外扫描图谱方法定性和定量的证明了氯霉素全抗原合成实验的偶联成功，偶联比率分别为：CAP-BSA17.1:1、CAP-OVA10:1。本实验用CAP-BSA作为免疫原免疫了三只Balb/c小鼠，采用间接ELISA方法对小鼠血清抗体效价进行检测，抗体效价分别为1：6400、1：6400、1：12800，并对小鼠血清进行敏感性测定，选取小鼠血清效价和敏感性最好的三号小鼠进行融合实验。细胞融合实验后，筛选出了三株效果好的杂交瘤细胞，分别为2A6、4E10、4E12。将这三株细胞分别注射到Balb/c小鼠腹腔中，7天后收集腹水，检测效价，2A6、4E10、4E12的杂交瘤细胞株的细胞培养上清液的效价分别为1：12800、1:6400、1:6400。2A6、4E10、4E12的腹水抗体效价分别为1:51200、1:25600、1:25600。选取2A6的抗体，采用竞争ELISA法对其灵敏度和特异性进行测定，证明了所制备的2A6抗体是针对CAP的，且具有较好的特异性，测定了CAP标准品的IC50值为3.125ppb。本实验还对氯霉素的类似物进行了交叉反应实验，测得氯霉素2A6抗体与氟苯尼考、甲砜霉素、四环素、磺胺二甲嘧啶的交叉反应率都低于0.01％，说明本实验制备的抗氯霉素单克隆抗体具有良好的特异性。本实验使用间接竞争ELISA法对CAP残留物进行检测，所得的灵敏度达到2.213ppb,该方法对标准品的检测限为0.17ppb。本研究制备了抗氯霉素的单克隆抗体，初步建立了检测氯霉素的酶联免疫方法，并对反应条件中的抗原抗体反应时间、一抗浓度、抗原包被条件、酶标二抗浓度和包被浓度五个条件进行了优化。本实验为进一步研究氯霉素残留物的检测产品提供了理论基础。