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目的:
建立一种简便、快速、灵敏、准确的高效液相色谱测定食品中还原型VC与总VC的新方法，应用该定性、定量方法测定常见富含VC的饮料、水果、蔬菜等食品中的还原型VC与总VC的含量；考察VC的稳定性；提醒人们在日常生活中合理食用富含VC食品，为科学饮食提供依据。在此方法基础上，建立以水.甲醇为流动相的梯度洗脱高效液相色谱同时测定5种常见水溶性维生素。VC、VB1、VB2、VB3和VB6的分析方法，应用该方法对多维片和多功能饮料中的5种常见水溶性维生素进行准确、快速的定性、定量分析。
方法:
1.色谱分析条件1.1 VC的测定反相高效液相色谱法，Waters 515高效液相色谱仪，Waters2996二极管阵列检测器，Atlantis dC18柱，流动相为0.1％乙酸水溶液。样品不经DTT还原直接测定还原型VC；经DTT还原后测定总VC。流速1.0ml/min；检测波长245 nm，进样量10μL。柱温：30℃。
2.2水溶性维生素的测定反相高效液相色谱法，岛津LC-10AVP高效液相色谱仪，紫外光度检测器，Waters.Atlantis dC18柱，流动相为0.2％的醋酸水溶液和甲醇；采用线性梯度洗脱；进样量10μL。柱温：30℃。
2.还原剂DTT还原能力与稳定时间用一定浓度的VC标准溶液，调节pH4.5～6。在日光直接照射下使其浓度降至约为原液的10％(当天使用)。取上述氧化VC液，与同体积DTT溶液室温暗处反应。以一定的时间间隔取出进样测定。
3.样品处理
3.1饮料用0.01 mol/L，HCl稀释至一定浓度，0.45 μm滤膜过滤，4℃放置备用。
3.2水果及蔬菜样品切碎后，充分混匀，定量称取一定量样品，加入适量5 mmol/L KH2PO4溶液，经高速分散器匀浆后，定量转移至容量瓶中，用5 mmol/L KH2PO4水溶液定容，取上层液4000rpm离心，取上清液4℃放置备用。
3.3多维片取多维片10片碾匀，准确称取一定量样品于25mL 容量瓶中，加0.01mol/L HCl 20mL，超声震荡30min，定容，混匀静置片刻，取上清液经0.45岬微孔滤膜过滤后进样分析。
4.还原型VC与总VC的测定还原型VC样品溶液用0.01 mol/L HCl稀释至一定浓度，0.45 μm滤膜过滤，进样分析。总VC样品加水稀释至一定浓度，定容前调节pH至4.5～6，0.45 μm滤膜过滤。取滤液与同体积DTT溶液室温下暗处反应20 min，进样分析。
5.方法准确度与精密度评价5.1校准曲线分别绘制5种维生素的标准曲线，求其相关系数和线性范围；并将标准系列的最小浓度再逐级稀释，进样分析，得到各维生素的检出限。
5.2回收率与精密度取一定量的标准品溶液，分别做加标回收试验，在一天内重复测定5次，连续测定5天，计算回收率及其精密度。
6.稳定性试验6.1 4℃放置时间用0.01mol/L HCl为溶剂配制各种水溶性维生素标准使用液，于4℃冰箱中，进行24h稳定性试验。
6.2 VC的稳定性用DTT还原，研究各种实验条件下还原型VC被氧化的程度及总VC含量的变化，观察放置时间、温度、紫外线照射、不同酸碱度环境、氧化剂和蔗糖对VC稳定性的影响。
结果：
1.样品处理及色谱分析条件样品处理方法简单；待测组分出峰时间短，5种水溶性维生素均能在17min内出峰，且与样品基质在本文色谱条件下分离良好。
2.还原剂DTT还原能力与稳定时间DTT的还原能力不受样品基质的影响，在本实验条件下把AA还原为DHAA的程度均大于95％；且在2h内稳定。
3.方法准确度与精密度评价①标准曲线线性范围宽，r值0.9982～0.9998，还原型VC的检出限为0.05μg/mL，总VC的检出限为0.1μg/mL；其它4种水溶性维生素的检出限在0.00μ/mL～0.05μg/mL之间。②样品加标回收率均在90.0％～108.7％之间；③日内RSD为1.8％～4.8％，日间RSD为4.6％～8.9％；④DTT还原.高效液相色谱法测定总VC与国家标准方法荧光法比较：经配对t检验，t=-0.691(P>0.50)，按a=0.05水平，两种方法差别无统计学意义。
4.稳定性实验①5种水溶性维生素，在稀盐酸介质中于4℃放置均可稳定较长的时间。②VC在加热温度不很高时(60℃)，AA主要转化成了DHAA，而在较高的温度下(100℃)，AA主要水解成了2，3-二酮古乐糖酸。且随着加热时间的延长而比例增大；低温下(4℃)影响较小。紫外线、碱性环境及氧化剂均影响VC的稳定性。
结论
本文建立的DTT。还原.高效液相色谱法测定食品中还原性VC和总VC以及梯度洗脱高效液相色谱法同时测定5种水溶性维生素的分析方法简便、快速、重现性好、准确度高，适用于食品和保健品中多种水溶性维生素的测定。含VC的食品应避免在高温加热、阳光下曝晒、碱性环境中及用氧化剂处理，多种水溶性维生素低温环境中均可保存较长时间。