人内源性逆转录病毒（human endogenous retroviruses,HERV）是几百万年前整合到人类基因组中,并以孟德尔方式遗传至今的逆转录病毒的残余物,约占人类基因组DNA的8%。大多数HERVs在进化过程中由于突变、缺失等的积累失去了编码能力,但仍有少数HERVs的开放阅读框（Openreading frames,ORFs）被完整保留了下来。这些完整的ORFs可以编码逆转录病毒的蛋白,在一些特定的组织内表达或一些组织分化发育的特定阶段表达,而在某些疾病情况下的异常表达提示其可能与疾病的发生发展相关。HERVs已被证实与肿瘤形成密切相关,如乳腺癌、慢性骨髓瘤白血病。研究发现syncytin mRNA和syncytin蛋白在9种白血病或淋巴瘤细胞系中均有表达。本论文通过实时定量PCR技术检测淋巴瘤细胞系、正常人外周血单个核细胞（PBMC）、白血病患者外周血中syncytin的表达情况,结果显示,syncytin在正常PBMC中无表达,在8种淋巴瘤细胞系中高表达,在白血病外周血中的表达与淋巴瘤细胞系C8166相比,介与0.8-21.7倍不等。另外,临床资料表明,syncytin基因mRNA表达水平与白血病患者病情正相关,且经治疗好转后syncytin基因mRNA表达水平下降。表明syncytin与白血病的发生发展有关。Syncytin蛋白的373-397残基是一个具有免疫抑制活性的多肽,其在细胞表面的大量表达利于癌变细胞逃避免疫打击,同时其具有的融合活性有利于细胞的迁移。近一步证明了 syncytin基因参与了白血病的免疫逃逸。其与白血病免疫逃逸的相关性仍需进一步研究。本研究根据人syncytin基因编码区序列（核苷酸库中的编号:NM₀01130925.1）设计引物,引物包括外围引物和内围引物。以C8166细胞总RNA为模板逆转录为cDNA。利用巢式PCR技术扩增人syncytin基因ORF全长序列。PCR产物纯化凝胶回收后与PIRES2-EGFP空载质粒经限制性内切酶EcoR I和BamHI酶切后纯化,确定连接反应体系,在T4连接酶作用下16℃金属浴过夜连接。连接产物转化DH5α感受态细胞,并接种于Kan抗性LB培养皿,挑取阳性重组子。利用菌液PCR法和酶切法对挑选的阳性克隆进行初步验证,对初步验证为阳性的克隆扩大培养,提取质粒后送样测序。测序结果在NCBI上Blast比对,序列完全正确的克隆及为重组表达载体,命名为PIRES2-syncytin-EGFP。重组质粒的构建为syncytin基因功能的研究提供了工具。为了弄清syncytin基因的功能是如何参与到人白血病的免疫逃逸中,本研究拟建立稳定表达Syncytin蛋白的细胞系,探索Syncytin蛋白在肿瘤细胞中的作用。实验采用罗氏公司的X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent脂质体转染试剂,实验分别转染了 PIRES2-syncytin-EGFP和空载体质粒到ELA细胞中,转染48 h后荧光倒置显微镜下观察,可见细胞发绿色荧光。利用G418抗性培养基筛选稳定表达syncytin的细胞株。维持筛选浓度持续筛选,当荧光倒置显微镜下观察时细胞均能发出荧光,利用有限稀释法挑选单克隆细胞株,对挑选的单克隆细胞株扩大培养并筛选,获得稳定表达syncytin的细胞株,命名为EL4-syncytin。利用实时荧光定量PCR技术检测EL4-syncytin细胞中syncytin基因表达水平。实验设计了 syncytin基因和内参基因GADPH进行实时荧光定量PCR检测,经检测EL4-syncytin中syncytin基因mRNA表达水平远高于空载体对照组。我们利用Western blot印迹对EL4-syncytin及空载体组进行蛋白水平的检测,结果显示EL4-syncyitn组中Syncytin蛋白表达水平远超对照组。上述实验揭示了稳定表达Syncytin蛋白的EL4-syncytin细胞系构建成功。综上所述,本实验成功从C8166细胞中克隆了人syncytin基因编码区全长,并成功将该序列插入真核表达载体PIRES2-EGFP中,利用菌液PCR、酶切、测序鉴定,测序结果与Genebank syncytin基因序列完全符合,成功构建了真核表达载体PIRES2-syncytin-EGFP。利用脂质体转染法将重组表达载体转染到EL4细胞并利用G418筛选出稳定表达Syncytin的细胞株。利用实时荧光定量PCR法及Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测EL4-ssyncytin细胞中syncytin表达。结果显示ELA-syncytin细胞稳定表达Syncytin。稳定表达Syncytin的ELA-syncytin细胞系的构建,为探讨syncytin与白血病免疫逃逸机制的研究提供了分子基础和细胞模型。