随着社会竞争压力的不断增大,人们所面临的各种应激事件也在不断增多,关于应激所引起的各种身心疾病已日益受到人们的重视。妊娠期是妇女所经历的一个特殊时期,在这一时期内,她们也无可避免会经历各种应激事件,孕期应激是否对子代也能产生影响,这是国内外学者越来越关注的一个课题。本实验建立大鼠妊娠期应激模型,检测应激组与对照组子鼠海马组织内环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CAMP-responsive element binding protein CREB)和脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor BDNF)的表达,并检测各组子鼠行为活动和学习记忆成绩,来探讨孕期应激对子代大鼠的影响。材料与方法1对象使用郑州大学医学院实验动物中心提供的纯种性成熟Wistar大鼠。雌性大鼠32只,雄性大鼠8只。2方法2.1模型建立:晚上22:00让雌雄大鼠合笼,次日晨8:00对雌鼠进行阴道涂片,将显微镜下可见精子的雌鼠视为已受孕,将受孕的雌鼠随机分为对照组和应激组,对照组正常饲养至分娩,应激组妊娠期施加束缚应激。在孕鼠妊娠第19天时,分别取对照组与应激组孕鼠尾部血1ml,利用酶联免疫吸附法检测各组孕鼠血液内糖皮质激素水平。将各组孕鼠所产子鼠正常饲养至一月龄时,每组随机选取雌雄子鼠各30只进行实验。2.2旷场实验:利用旷场实验装置进行行为活动检测,将子鼠跨越的水平格数定为水平运动得分,后肢站立的次数定为垂直运动得分,记录各组子鼠水平运动得分和垂直运动得分,然后比较各组差异。2.3 Y-型电迷宫实验:利用Y-型电迷宫进行学习记忆检测,每只子鼠分别测试三天,取第三天的成绩作为子鼠的学习记忆成绩,然后比较各组差异。2.4标本采集:Y-型电迷宫实验结束后,将各组子鼠麻醉后处死,对海马组织进行常规石蜡包埋、切片,分别做苏木素-伊红染色及免疫组化染色。2.5 CREB和BDNF表达水平的测定:在海马组织免疫组化染色切片上,应用计算机图像分析系统,选取阳性区测量其灰度值并计算出其平均灰度值(OD),利用平均灰度值来比较各组子鼠海马组织内CREB和BDNF表达水平的差异。3统计学处理使用SPSS15.0统计软件包进行统计分析,各组数据均以(?)±s表示,通过独立样本t检验和单因素方差分析进行组组间比较,以α=0.05作为检验水准。结果1孕鼠糖皮质激素水平比较实验结果显示,应激组孕鼠尾部血中的糖皮质激素水平(41.95±10.47)明显大于对照组(20.58±9.39),差异具有统计学意义(t=16.836,P=0.027)。说明产前应激可提高孕鼠体内的糖皮质激素水平。2子鼠旷场实验结果应激组子鼠与对照组子鼠在水平活动得分方面的比较:应激组子鼠水平活动得分大于对照组(F=4.316,P=0.003),对照组雌雄之间及应激组雌雄之间不存在性别差异(P＞0.05);应激组子鼠与对照组子鼠在垂直活动得分方面的比较:应激组子鼠垂直活动得分大于对照组(F=7.471,P=0.002),对照组雌雄之间及应激组雌雄之间不存在性别差异(P＞0.05)。3子鼠Y-型电迷宫结果应激组子鼠与对照组子鼠在学习记忆方面的比较:应激组子鼠学习记忆成绩低于对照组(F=6.562,P=0.002),对照组雌雄之间及应激组雌雄之间不存在性别差异(P＞0.05)。4子鼠海马组织HE染色结果雌、雄对照组子鼠海马齿状回的颗粒细胞排列较密集有序,而雌、雄应激组子鼠海马齿状回的颗粒细胞排列较疏松杂乱,在海马体积与形状方面相比,两者无明显区别。5免疫组化结果5.1 CREB免疫反应阳性细胞呈棕黄色,主要定位于细胞核,在海马的CA1区、CA2区、CA3区和齿状回区均有表达,主要分布于海马齿状回的颗粒细胞层。CREB在雌性应激组海马组织的表达(87.77±6.34)低于雌性对照组(92.51±6.53),P＜0.05;在雄性应激组海马组织的表达(86.73±7.25)也显著低于雄性对照组(93.33±6.43),P＜0.05;CREB在对照组雌雄之间、应激组雌雄之间的表达无性别差异(P＞0.05)。5.2 BDNF免疫反应阳性细胞呈棕黄色,主要定位于细胞浆和胞膜,在海马的CA1区、CA2区、CA3区和齿状回区均有表达,在海马的CA1区和齿状回的颗粒细胞层染色较深。BDNF在雌性应激组海马组织的表达(86.96±7.32)低于雌性对照组(94.85±6.96),P＜0.05;在雄性应激组海马组织的表达(87.32±7.00)也显著低于雄性对照组(95.32±7.01),P＜0.05;BDNF在对照组雌雄之间、应激组雌雄之间的表达无性别差异(P＞0.05)。结论1.孕鼠产前应激可能导致子代海马组织内CREB和BDNF表达的下降。2.孕鼠产前应激可能导致子代出现活动过度、兴奋等行为情绪问题。3.孕鼠产前应激可能导致子代学习记忆力的下降。4.孕鼠产前应激对子代的影响可能无性别差异。