RNAi剔降人蛋白激酶CK2α亚基的表达及其对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖影响的研究

来源 :广东医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aiaiai19870310
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  本文以RNA干扰(RNAi)技术剔降人蛋白激酶CK2α亚基的表达,观察其对人乳腺癌细胞生长增殖抑制的效果,探讨肿瘤新的治疗策略研究根据人CK2α基因序列及二级结构特征,依据Tuschl等设计shRNA的原则,确定CK2α基因的干扰位点,以mU6provector质粒为载体,以定向克隆的方法构建针对人蛋白激酶CK2α亚基的重组shRNA表达质粒;电泳法初步筛选正确的重组克隆;DNA测序验证重组克隆插入序列的正确性;通过将重组质粒与绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1在脂质体LipofectamineTM2000介导下共转染的方法,荧光显微观察转染效果;MTT法观察RNAi作用对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的影响,并筛选最有效的RNAi作用位点;流式细胞术检测RNAi对肿瘤细胞周期的影响及凋亡情况;MTT法及流式细胞术检测RNAi对肿瘤化疗药物紫杉醇抗癌作用的影响。
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