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目的脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)是临床常见多发病,其致残率高,发病率逐年攀升,在众多疗法中,嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植的疗效最佳。临床移植的细胞源于流产胎儿的嗅球,其来源少,时间、地点不确定,而需要临床移植治疗的SCI病人亦同样存在时间、地点不固定等问题。流产胎儿的嗅球需要及时取材培养,因OECs不能无限传代,且在培养过程中极易受成纤维等杂细胞的污染,培养10-14天即需移植,因此,细胞培养与临床移植间存在时间和区域差,极大限制了其临床应用。因OECs来源少,为有效利用资源,造福更多脊髓损伤患者,需帮助OECs安全地度过时间和区域差,因此细胞的保存非常重要。本试验的目的是探讨OECs长期保存的最佳方式及OECs保存的时限等问题,为临床应用提供理论依据。材料与方法取2.0个月龄雄性健康Wistar大鼠的嗅球,进行OECs培养,收集对数生长期细胞,随机分为五组,A组和D组：1号冻存液悬浮；B组和E组：2号冻存液悬浮；C组：3号冻存液悬浮(10％DMSO.5％DMSO.6％HES.5％DMSO分别为1、2、3号冻存液的低温保护剂)。A组、B组、C组采用冰箱降温液氮保存方式；D组和E组采用程控降温仪降温液氮保存方式。标本保存一月、三月和半年后复苏,镜下观察复苏标本的细胞形态,行MTT比色法、台盼蓝染色法(TBR)检测标本活性,各指标均行组间组内对比。结果镜下见5%DMSO-6％HES组标本复苏细胞胞体透光度和立体感较好,皱缩细胞及裂解细胞碎片少,细胞贴壁和增殖较快；5%DMSO组易见皱缩细胞和细胞碎片,胞体透光度和立体感差的细胞数量多,细胞贴壁时间长且增殖慢；而10%DMSO组居于二者之间。标本保存一月、三月及半年后复苏,其中：1.同种保存方式下,组内差异不显著(P>0.05)；2.同种低温保护剂下,冰箱降温液氮保存与程控降温仪降温液氮保存相比,差异不显著(P>0.05)；3.不同低温保护剂下,5％DMSO-6％HES组细胞的活性比10％DMSO组好,差异显著(P<0.05)；10％DMSO组比5％DMSO组好,差异显著(P<0.05)冰箱降温液氮保存三月,复苏细胞继续培养5天检测,B组细胞的活性比A组和C组均好,差异显著(P<0.05)；A组比C组好,差异显著(P<0.05)。1、2和3号冻存液随机分组悬浮OECs,室温放置2小时后检测,每组细胞的活性均有下降,10％DMSO组明显低于另两组,差异显著(P<0.05)；而后两组差异不显著(P>0.05)。标本低温保存半年后复苏,细胞不再洗涤,继续存于原冻存液内,室温下放置不同时间,每组细胞活性均下降,以10％DMSO组影响最大。结论1.选取OECs冻存液时,主张使用5％DMSO-6％HES作为低温保护剂：2.对于小样本OECs的保存,选用冰箱降温液氮保存方式；3.对于大样本OECs的保存,可选用程控降温仪降温液氮保存或冰箱降温液氮保存方式；4.低温保存半年的OECs仍具有较好的细胞活性；5.细胞复苏后,标本内的低温保护剂应立即洗涤去除,然后再行细胞培养或移植应用。