鹿衔草对去卵巢大鼠钙调节激素的影响

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目的:通过在体实验,建立去卵巢大鼠骨质疏松动物病理模型,观察鹿衔草氯仿极性部位对机体钙调节激素降钙素、甲状旁腺素、1,25双羟维生素D3及骨密度、血清雌二醇水平、骨形态计量学等相关指标的干预作用,从钙调节激素角度探讨鹿衔草防治绝经后骨质疏松的作用机制,为鹿衔草的临床应用提供实验依据。方法:1、鹿衔草氯仿极性部位的提取:鹿衔草饮片用95%工业酒精浸泡2h后,加热到微沸,回流,抽滤,浓缩,浸膏;然后将浸膏溶解,先用石油醚萃取,然后用氯仿萃取得到的浸膏,干燥后,得到粉末。2、动物的选择与动物病理模型建立:3月龄清洁级雌性SD大鼠30只,随机分成造模组20只和假手术组10只,将造模组采用双侧卵巢结扎切除的方法建立骨质疏松病理模型。假手术组除未行卵巢结扎切除外,其余步骤同造模组。3、动物分组及药物干预:造模组20只随机分为模型对照组、鹿衔草干预组,每组10只。术后第3天开始药物干预,假手术组、模型对照组灌服生理盐水2m1·只-1·天-1;鹿衔草干预组灌服鹿衔草氯仿极性部位0.02852g·kg-1·天-1,将鹿衔草氯仿极性部位粉末用2m1生理盐水制成混悬液后灌服,每天1次,连续12周。各组动物于处死前13、14天和前3、4天分别皮下注射盐酸四环素(25mg·kg-1)对骨进行荧光标记。所有实验动物每3天称一次体重,记录体重变化。4、取材及指标检测:连续灌药12周后第一天,各组动物予2%戊巴比妥钠(40mg·kg-1)腹腔注射麻醉,先活体测定骨密度,随后处死取材:(1)血液:腹主动脉取血,分离血清,测定血清雌激素(E2)、骨钙素(BGP)、甲状旁腺素(PTH)、1,25双羟维生素D3[1,25(OH)2D3]、降钙素(CT)等指标水平;(2)子宫:摘取子宫,使用电子天平称子宫湿重后,计算子宫指数,并固定于10%福尔马林,制作HE染色切片,测量子宫内膜厚度;(3)骨骼:分离右侧股骨,固定于10%福尔马林,EDTA脱钙,制作HE染色切片,骨组织形态静态参数计量。右侧胫骨固定于70%酒精,用乙醇逐级脱水,二甲苯透明,制作骨磨片,进行骨组织形态动态参数计量。结果:1、卵巢切除术后4周开始,模型对照组、鹿衔草干预组大鼠体重明显增加,与假手术组比较有显著性差异(p<0.01)。至术后8周、12周,模型对照组、鹿衔草干预组大鼠体重仍保持显著增加的趋势,依然高于假手术组,且具有显著性差异(p<0.01)。2、三组中模型对照组股骨、脊柱及全身骨密度最低,尤其是全身骨密度值明显低于假手术组与鹿衔草干预组,差异显著(p<0.01);鹿衔草干预组股骨、全身骨密度也低于假手术组(p<0.05)。3、模型对照组、鹿衔草干预组大鼠子宫指数较假手术组大鼠子宫指数明显减小(p<0.01)。4、卵巢切除术后12周,模型对照组大鼠血清E2水平明显降低,而BGP水平却明显升高,与假手术组比较具有显著差异(p<0.01);鹿衔草干预组在术后12周血清E2水平明显高于模型对照组与假手术组,均具有显著差异(p<0.01),BGP水平明显低于模型对照组,差异有显著意义(p<0.01)。5、卵巢摘除术后12周,模型对照组血清中1,25(OH)2D3、CT水平都明显下降,而PTH含量却急剧升高,与假手术组相比差异显著(p<0.01)。鹿衔草干预组血清中1,25(OH)2D3、CT水平均比模型对照组、假手术组上升,而PTH水平从数字上看,均低于其它两组,尤其低于同期模型对照组(p<0.01),与假手术组比较则无统计学差异(p>0.05)6、模型对照组大鼠股骨上段骨组织BV/TV下降,而Tb.Sp却显著升高,与假手术组相比差异显著(p<0.01)。鹿衔草干预组BV/TV、Tb.Sp值介于二者之间,BV/TV值较模型对照组升高,而Tb.Sp值下降,差异显著(p<0.05),与假手术组比较,BV/TV值下降,而Tb.Sp值上升,差异显著(p<0.05),模型对照组和鹿衔草干预组大鼠骨组织dL.Wi、MAR等指标较假手术组大鼠明显升高(p<0.01)。结论:1、本实验采用切除3月龄SD雌性大鼠双侧卵巢的方法,12周后能成功模拟绝经后高转换型骨质疏松,建立实验病理模型。2、鹿衔草氯仿极性部位通过植物雌激素样作用,提升血清E2水平,影响机体钙调节激素,降低骨转换率,改善骨结构。
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