目的:　　衰老(senescent)是不可抗拒的自然规律。随增龄的发生以及外界环境的刺激，机体各细胞、组织、器官出现不可逆的退行性生理变化。主要表现为皮肤粗糙皱纹、记忆力下降、行动迟缓、各主要脏器（脑、肝、肾、心、肺）功能减退等。衰老过程虽无法避免，但延缓衰老却是可能的，这也是古今中外人类永恒的向往和追求。近年来，面对人口老龄化的严峻挑战，因衰老所导致的各类老年性疾病不断发生，这严重影响了老年人的生存质量，同时也使得各种医疗和社会问题日益凸显。因此，研究抗衰老对策一直是生命科学界倍受关注的前沿课题，同时如何防治衰老相关疾病也显得极为迫切。　　祖国医学博大精深，中医药抗衰老的作用不可否认。中草药野菊花(Chrysanthemum indicum Linné.，C.indicum)清热解毒，疏风平肝功效甚佳。其主要成分为黄酮类、酚酸类、挥发油和萜类等热不稳定性成分，而超临界二氧化碳萃取技术(Super critical-carbon dioxide fluid extraction，SCFE)可以有效保留这些热敏性成分，且高效、绿色环保、工艺稳定。故本研究的受试药物采用野菊花CO2超临界萃取物(SCFEextract of C.indicum，CISCFE)。现代药理研究显示野菊花具有显著的抗氧化，清除氧自由基作用，同时被本课题证实其具有良好的抗炎效果，但目前国内外对于野菊花抗衰老作用的研究鲜有系统的文献报道。鉴于氧化与炎症反应是公认的衰老相关疾病的重要参与者，故基于野菊花显著的抗氧化和抗炎效果，预示其在拮抗机体老化领域有开发潜力。　　因此，本课题应用内源性老化以及外源性老化的两个典型动物模型:D-半乳糖(D-galactose，D-gal)致小鼠拟自然衰老模型和紫外线(Ultraviolet rays，UV)致小鼠皮肤光老化模型，分别探讨CISCFE对各自的保护作用，以期阐明其可能的作用机制，旨在将中药野菊花开发成高效低毒的延缓衰老新药提供基础研究资料。　　方法:　　1.CISCFE延缓D-gal致衰老的活性研究　　本研究以KM小鼠为实验动物，采用D-gal(200 mg/kg)连续颈部皮下注射方式，建立D-gal诱导的亚急性衰老模型，模拟与自然衰老体征类似的动物模型;在该模型基础上，灌胃给予实验小鼠CISCFE(100、150 and300 mg/kg)进行治疗，通过观察其外观特征（饮食、体重增长、精神状态、毛发、行为活动），测量各个脏器指数（胸腺、脾脏）以及运用H&E染色方法来评价脑组织和肝组织的病理结构变化情况，考究CISCFE对D-gal衰老小鼠的保护作用。　　2.CISCFE延缓D-gal致衰老的作用机理研究　　采用CISCFE灌胃给药的方式治疗衰老模型小鼠，运用生化定量法分析小鼠脑组织和肝组织中T-AOC能力，抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)的活性以及丙二醛(MDA)含量;采用酶法于全自动生化仪上测定血清中AST、ALT的浓度;通过ELISA技术分析小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平;利用Western-blot技术检测BaxBcl-2、Caspase-3表达以此进一步探讨CI SCFE延缓衰老的作用机制。　　3.CISCFE抗UV致皮肤光老化的活性研究　　本课题以UVA+UVB为光源、选取雌性KM小鼠为实验动物，通过最小红斑剂量递增法制备小鼠皮肤光老化模型。在该模型基础之上，外用涂布CISCFE(1.2、3.6 and12 mg/mouse)进行治疗，采用宏观评分、提皮测试、双层皮肤厚度测量等方法评价皮肤松弛、皱纹以及增厚等整体表观情况，探讨CISCFE对UV致光老化小鼠皮肤的保护作用。　　4.CISCFE抗UV致皮肤光老化的作用机理研究　　通过外用涂布CISCFE的方式来治疗光老化模型小鼠皮肤损伤，采用生化定量法检测小鼠皮肤组织中SOD、CAT、GSH-Px的活力，MDA浓度以及Hyp的含量;运用ELISA技术分析皮肤中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平，以及MMP-1和MMP-3的表达。此外，通过H&E染色、醛品红特殊染色等实验手段，整体考察实验动物皮肤组织病理学方面的变化，其中以胶原纤维和弹性纤维的病变为重点评价对象，从而探讨CISCFE对抗皮肤光老化的作用机制。　　结果:　　1.CISCFE延缓D-gal致衰老的活性研究　　在D-gal诱导的亚急性衰老模型中，CISCFE（尤其是中高剂量）可以显著改善模型小鼠的宏观衰老体征，缓解精神萎靡，毛发稀少、反应迟缓等情况;提高了老鼠体质量的增重率，抑制主要免疫器官（胸腺和脾脏）的萎缩;明显缓解小鼠肝组织和脑组织微观结构的病理变化，保护神经元细胞以及肝细胞的正常结构形态。　　2.CISCFE延缓D-gal致衰老的作用机理研究　　在D-gal诱导的衰老小鼠模型中，CISCFE可以明显提高肝组织和脑组织中的T-AOC水平以及抗氧化物酶类(SOD、CAT、GSH-Px)的活性，降低MDA含量;减少血清中AST、ALT的含量;降低TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌量;下调Bax、Caspase-3蛋白表达，上调Bcl-2蛋白的表达。　　3.CISCFE抗UV致皮肤光老化的活性研究　　在UV诱导的小鼠光老化模型中，CISCFE可以有效改善皮肤宏观特征，修复皮肤粗糙、皱纹、松弛以及不规则增厚等损伤;明显缩短提皮测试所需时间，降低双层皮肤的厚度。　　4.CISCFE抗UV致皮肤光老化的作用机理研究　　在UV诱导的光老化动物模型中，CISCFE能有效保护光老化模型小鼠皮肤中胶原纤维以及弹性纤维形态结构;显著提高皮肤SOD、CAT和GSH-Px的活力，降低MDA水平;增加Hyp的含量;减少炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α)的分泌;并且能抑制MMP-1及MMP-3的表达水平。　　结论:　　本课题利用老年医学经典的内源性衰老模型-D-gal致亚急性衰老模型，首次发现CISCFE具有一定延缓自然衰老作用，其潜在机理可能是通过提高机体抗氧化能力，增强机体免疫功能，抑制炎症介质的释放，防止细胞凋亡的发生。这提示CISCFE在防治机体老化性疾病方面，可能具有潜在的疗效。此外，采用公认的外源性衰老模型一UV致皮肤光老化模型，率先证实CISCFE具有一定抗皮肤光老化的作用，其发挥作用的机制可能通过提高皮肤组织中抗氧化酶的活性，减弱脂质过氧化物累积，降低炎性因子的分泌以及抑制MMPs的过表达，这提示CISCFE可以防治皮肤光老化的发生，存在一定的开发潜力。