LEA基因改造和载体构建及旱稻遗传转化

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水稻是全球主要粮食作物,旱稻,又叫做陆稻,性耐旱,是适合在旱地种植的栽培稻,是水稻的变异型。采用生物技术分离抗旱基因,并通过转基因方法培育早稻抗逆新品种,是提高作物产量的有效途径,本课题以早稻成熟种子为外植体,利用农杆菌转化的方法,将抗逆基因LEA转入植物基因组中,从而获得转基因抗逆性早稻新品种。  为了使LEA基因在植物体内更高效的表达,将LEA基因构建到pCAMBIA3301中,在多克隆位点插入泛素启动子,并且用Bar基因做为筛选标记基因。将构建好的表达载体pCAMBIA3301-LEA质粒转入农杆菌Agl-1中,用农杆菌转化法将目的片段导入早稻中。将已得到的转基因早稻植株进行DNA水平的鉴定。  对的得到的转基因旱稻的种子进行DNA提取,设计目的基因LEA引物,进行PCR扩增,初步筛选已将LEA基因整合到早稻基因组中阳性植株,待到T3代种子时,可通过Tail-PCR技术来确定目的基因的插入位点,通过RT-PCR鉴定目的基因在基因组中是否表达,确定稳定遗传的早稻的新品系。
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