蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及作用机制研究

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiyinbo007
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背景:宫颈癌(Cervical carcinoma)是最常见的妇科恶性肿瘤,并且目前宫颈癌的发病趋势呈现年轻化,严重影响着女性的身体健康。其中约超过85%的宫颈癌病例和死亡发生在发展中国家。人宫颈鳞癌细胞SiHa是人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)阳性宫颈癌细胞株,SiHa细胞属于HPV-16黏膜高危型,能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。现代研究表明,中药及其活性提取物在治疗人宫颈癌方面具有多途径、多靶点、毒副作用小等优势。蛇葡萄素(Ampelopsin,AMP),又名二氢杨梅素,可从大叶蛇葡萄(Ampelopsis megalophylla Diels et.Gilg)等植物中提取,是一种重要的天然黄酮类化合物。近年来的研究表明蛇葡萄素具有广泛的抗肿瘤作用,然而其诱导宫颈癌细胞凋亡和自噬作用机制尚不明确,暂未被广泛开发和应用。目的:研究蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖抑制、周期及凋亡的影响,进一步探讨AMP对SiHa细胞的增殖抑制作用机制。方法:将不同浓度蛇葡萄素作用于SiHa细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测蛇葡萄素对SiHa细胞增殖的影响,Hoechst 33258法观察蛇葡萄素对SiHa细胞凋亡形态的影响,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,透射电镜观察蛇葡萄素对SiHa细胞超微结构的影响,Western blot法检测蛇葡萄素作用后细胞凋亡和自噬相关蛋白表达水平的变化。结果:与空白组比较,蛇葡萄素对SiHa细胞增殖有显著的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性(p<0.05);Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI双染法结果表明,随着药物浓度增加和作用时间的增长,观察到凋亡细胞增多,蛇葡萄素可诱导其凋亡(p<0.01);PI单染法检测细胞周期结果表明,AMP浓度040μM时,G0/G1期分布比例呈上升趋势,S期分布比例呈下降趋势;当AMP浓度4080μM时,G0/G1期分布比例下降,S期分布比例上升;随着AMP给药时间的增长,细胞周期阻滞在S期和G2/M期,并呈一定的时间依赖性;Rh-123染色检测随药物浓度的升高,线粒体跨膜电位(ΔΨm)下降,荧光强度增强;Western blot结果表明随着药物浓度升高,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比率和cleaved-Caspase-3表达水平均上调(p<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率、Beclin1表达水平上调(p<0.01),p62表达水平下调(p<0.01),PI3K/Akt/mTOR信号通路磷酸化蛋白表达均下调(p<0.01)。结论:蛇葡萄素对SiHa细胞增殖具有抑制作用,蛇葡萄素能够阻滞SiHa细胞周期并诱导其凋亡,从而使线粒体膜电位下降;同时,蛇葡萄素通过调控SiHa细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3和自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62表达水平,以及通过抑制PI3K、Akt、mTOR的磷酸化,从而抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化,促进SiHa细胞凋亡和自噬。
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