由中、低等毒力猪瘟毒株引起的非典型猪瘟目前正危害着我国养猪业发展,感染猪很难通过临床症状或普通血清学方法与猪瘟弱毒疫苗免疫猪进行区分,给猪瘟的净化造成了很大困难。猪瘟标记疫苗与对应鉴别诊断方法的配合使用能很好的解决上述问题。国内已有一种猪瘟E2亚单位标记疫苗上市,因此本研究希望建立一种与之对应的鉴别诊断方法。主要研究内容如下:人工合成国内猪瘟流行毒株2.1b亚亚型E^rns基因并将其克隆至pFastBac1载体获得pFastBac-E^rns重组质粒,将该质粒转化至DH10Bac感受态细胞进行同源转座,提取转座成功后得到的rBacmid-E^rns重组杆粒并转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,在Sf9细胞对重组杆状病毒进行连续2次扩增以获得高滴度重组杆状病毒,用高滴度杆状病毒感染High Five昆虫细胞后实现了E^rns蛋白的分泌表达,随后确定了最佳表达MOI和时间,分别为5和96h。亲和层析纯化到的重组E^rns蛋白约为35kDa,Western blot结果表明该蛋白具有良好的反应原性。以重组E^rns蛋白为诊断抗原,通过摸索各项ELISA检测条件,建立了猪瘟E^rns抗体间接ELISA检测方法E^rns-iELISA,其敏感性和特异性分别为86.14%和88.31%。E^rns-iELISA方法对猪瘟疫苗毒（83.47%）和野毒（93.33%）的E^rns抗体均具有较高的敏感性。用E^rns-iELISA方法检测猪瘟弱毒疫苗免疫猪血清时发现最早能检测到免疫后25天血清中的E^rns抗体,弱毒疫苗诱导的猪瘟E^rns抗体在猪体内存在时间至少为3个月;用E^rns-iELISA方法检测猪瘟E2亚单位疫苗免疫猪血清时发现E^rns-iELISA方法存在一定的非特异性反应,而这种非特异性反应可以通过提高重组E^rns蛋白的纯度进行优化。上述结果表明本研究通过以杆状病毒表达系统表达的重组猪瘟E^rns蛋白为诊断抗原所建立的E^rns-iELISA方法具有较好的敏感性和特异性,在E2亚单位疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别诊断方面具有潜在的开发和应用价值。