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鸡毒支原体（Mycoplasmagallisepticum，MG）感染可引发鸡的慢性呼吸道疾病，给养禽业造成巨大损失。持续使用大剂量抗生素可降低MG的危害，但经济负担沉重，并导致药物残留和细菌耐药株的出现。疫苗免疫可提供有效免疫保护，但现有的MG弱毒活疫苗需要在使用前后较长时期避免使用抗生素，同时存在一定副作用；灭活疫苗成本昂贵，使用不便，而且保护期较短，无法诱导粘膜免疫。研制安全、有效、经济、方便的新型MG疫苗仍具重要意义。MG黏附蛋白（ProteinofMycoplasmagallisepticumAdhesin，pMGA），简称黏附素，按国际标准命名法命名为VIhA，具有介导结合宿主细胞受体的功能，在MG侵入机体的过程中发挥重要作用。多基因家族vlhA.5.02基因编码的蛋白TM1是一种溶血素膜蛋白，已被研究证明是诱导机体产生保护性免疫的主要抗原之一，在不同MG菌株较为保守，变异率低。新城疫（Newcastledisease，ND）是世界范围内危害养禽业的重大疫病，各国多采用疫苗免疫预防ND。新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）弱毒LaSota疫苗株应用范围广泛，历史悠久，成本低廉，使用方便，可通过滴鼻、点眼、喷雾、饮水等多种途径接种，其安全性和有效性在生产中得到充分证明。采用NDV为载体构建重组NDV活疫苗预防禽传染病，具有一苗多防，使用方便，能同时有效激活体液免疫、细胞免疫和局部粘膜免疫的突出优势。本研究利用NDV弱毒LaSota疫苗株为载体，通过反向遗传操作，将MG溶血素膜蛋白TM1基因表达单元插入NDV基因组P-M基因之间，构建了表达TM1抗原的重组NDV（rL-TM1）。RT-PCR、免疫荧光实验和Western-blot检测结果表明，TM1基因在rL-TM1基因组获得准确重组，并能够在rL-TM1感染细胞获得正确表达。重组病毒rL-TM1对鸡胚的平均致死时间（MDT）为132h，脑内致死指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)均为0，保持了LaSota亲本株的低致病性。免疫试验结果显示，rLa-TM1按106鸡胚半数感染量（EID50）接种1周龄无特定病原（SPF）雏鸡，可诱导显著的MG特异ELISA抗体反应；同时诱导的NDV特异血凝抑制（HI）抗体滴度与亲本LaSota疫苗株相比无显著差异。rL-TM1免疫接种后3周进行NDV强毒和MG强毒的攻击试验。结果，rL-TM1免疫鸡对NDV和MG攻击的发病保护率分别为（10/10）100%和(9/10)90%；作为对照,LaSota亲本株免疫鸡对NDV强毒的保护率为100%，MG后则100%发病，保护率为0。研究结果表明，表达MGTM1抗原的重组病毒rLa-TM1对鸡安全，能够对NDV和MG攻击提供有效免疫保护，作为预防ND和MG的重组二联活载体疫苗，具有应用潜力。