原发性胆汁性肝硬变(PBC)以免疫介导的，不可逆的肝内小胆管的破坏为特征，并可进一步导致肝硬变和肝功能衰竭。国内过去对PBC的重视不够，基础研究基本处于空白状态，但近年来该病的发病率呈上升趋势，并缺乏特异有效的治疗措施，因此加强对PBC病因及发病机理的研究为当务之急，以为进一步寻找新的治疗途径打下基础。 本病的病程多样，其早期诊断对识别快速进展性病人，尽快给予足够的治疗措施和评价肝移植的必要性十分重要。由于PBC本身的肝脏组织病理，生化指标和临床表现均缺少特异性，其血清学检测成为最重要的诊断手段。抗线粒体抗体(AMA，M2抗体)是PBC特异性的血清学标志，主要针对位于线粒体内膜的三个酮酸脱氢酶复合物家族(OADC)，其中最主要针对丙酮酸脱氢酶复合物的E2亚单位(PDC-E2)和E3结合蛋白(E3BP)。抗PDC-E2和PDC-E3BP的自身抗体可以分别在90-95％的PBC患者中检测出。为建立一个经济有效和特异的M2抗体检测系统，并为进一步研究PBC的发病机制等打下物质基础，本研究用RT-PCR分别扩增了PDC-E2和E3BP部分cDNA片断(分别为1.7kb和1.35kb)，分别克隆入原核表达载体pEXSec Ⅰ和pET28a(+)中，构建成重组表达质粒。在不同条件经IPTG诱导，PDC-E2和PDC-E3BP的重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)plysE中得到高效表达。二者的表达产物均以可溶形式存在，并可在免疫印迹实验中被PBC患者血清中的自身抗体特异性识别。以二者的表达产物包被酶联板，对包括427份 中 文摘要PBC患者、2465份其他肝病患者及 800份健康献血员的血清进行 ELISA筛选检测，PBC患者的阳性率高达93．3％，而其它肝病患者和健康人的阳性率极低，说明上述重组蛋白与PBC病人血清中的自身抗体结合的特异性较高；与德国欧盟公司的MZ抗体试剂盒比较，本方法对PBC的诊断的帮助性不亚于前者，因此有很好的试剂盒开发前景。 有资料显示PBC患者肝内小胆管破坏可能主要由自身反应性的T细胞介导的细胞免疫引起，并推测PDC－EZ是可能造成上述兔疫损伤的靶抗原之一。本研究用纯化的PDC－EZ重组蛋白对PBC患者外周血淋巴细胞（PBMC）进行体外刺激实验，对其可能的致病机理进行初步探讨。结果显示 12例 MZ抗体（或 AMA）阳性的 PBC患者中有 10例其 PBMC在刺激后出现不同程度的增殖，其中大部分O0／12）表现为几 类细胞因子O 入IFN7）和TNF－a分泌增加，这在4例早期患者中表现尤为明显，仅有2例中、晚期患者表现为h 类因子（IL4，IL－10）和TNF－a分泌增加。本研究结果不仅提示了PDC－EZ作为靶抗原诱导机体产生自身兔疫损伤的可能性，还提示了在其诱导的自身免疫反应中，Thl和 ThZ细胞亚群之间有严重的平衡失调，并且这种不平衡状态可随着病程的进展而改变，从而为PBC的治疗提供了一些新的思路。 同许多其他自身免疫性疾病一样，基因遗传因素被认为在PBC的发病中可能起了重要作用。其发病以女性多见和明显的家庭聚集现象更提示了这种可能性。国外研究认为 PBC主要与 MHC 11类基因，特别是HLA0 基因关系密切，但在不同种族和人群间的研究结果并不一致，并且缺乏中国人群的相关资料。本课题利用基因芯片技术，检测了40例中国汉族人群PBC患者的HLA－DR型别，以寻找其中可能存在的PBC易感基因。结果显示，HLA－DR7在本组PBC患者中的检出率为50％，远高于健康对照组的10．4％（相对危险度m二8．57，P值＝0．000）和疾病对照组的19．2％叩值＝0．02）；HLA－DRS的检出率为22．5％，明显高于健康对照组的 7．5％（RR＝3．60，P值＝0．026），提示hA－DR7和DRS基因可能与中国人群的PBC发病有一定的相关性，其中DR7在其他文献中尚未见报道。对PBC易感基因的进一步研究可为PBC病因学研究打下基础，并为疾病的预测，诊断和预防提供帮助。