本实验目的是观察AG对TGF-β1诱导体外肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF、α-SMA的影响，为AG治疗肺纤维化机制的研究提供实验资料。 研究方法： 1.动物处理：选用雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，一次性气管内滴注BLMA5(5mg/kg)复制大鼠肺纤维化模型，于给药后第14天处死动物。 2.细胞培养：采用组织块法培养大鼠肺成纤维细胞，培养条件：RPMI1640培养液(含10％小牛血清)10ml、5％CO2、37℃，第4代细胞用于实验。 3.MTT法选择TGF-β1和AG的适宜浓度：将细胞悬液(细胞浓度为2×105个/ml)滴注于96孔板中，培养24小时后，分别加入不同浓度的TGF-β1(1、10、20ng/ml)和AG(20、100、500μM)，刺激24小时后测定细胞MTT活力，根据以上结果及参考文献选择TGF-β1和AG的适宜浓度。 4.细胞分组：成纤维细胞分为4个组：①Sham组、②TGF-β1组(浓度10ng/ml)、③AG+TGF-β1组(AG浓度500μM、TGF-β1浓度10ng/ml)、④AG组(浓度500μM)。 5.细胞免疫化学染色：将细胞悬液滴种于24孔板中，细胞浓度为2×105个/ml，每孔加液1ml，进行细胞爬片。加入各组药物24小时后，用免疫细胞化学染色技术检测CTGF、α-SMA阳性细胞。 6.流式细胞仪检测肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达α-SMA。 7.统计学处理：实验数据用均数±标准差((-x)±SD)表示，采用SPSS-11.5统计软件包，多个样本均数比较用单因素方差分析(One-WayANOVA)，多个样本均数间的两两比较用最小显著差法(leastsignificantdifference，LSD)；以P＜0.05作为判断差异显著性的标准。 研究结果： 1.MTT法选择药物浓度。TGF-β1(1、10、20ng/ml)及AG(20μM、100μM、500μM)各药物浓度组与不加药组相比，其差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明所选药物浓度对肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞无药物毒性。 2.肺成纤维细胞CTGF免疫细胞化学染色结果。TGF-β1诱导成纤维细胞表达CTGF的阳性细胞百分率(62.6±2.4％)、平均光密度值(平均OD值)(0.37±0.02)与Sham组(20.1±3.8％、0.29±0.02)比较，显著性增加(P＜0.01)。AG+TGF-β1组与TGF-β1组相比，CTGF阳性细胞百分率(57.4±3.8％)、平均OD值(0.35±0.02)均显著性降低(P＜0.05)；而与Sham组相比，仍然较高(P＜0.01)。AG组CTGF阳性细胞百分率(21.3±3.2％)、平均OD值(0.30±0.02)与Sham组相比，均无显著性差异(P＞0.05)。 3.肺成纤维细胞α-SMA免疫细胞化学染色结果。TGF-β1诱导成纤维细胞表达α-SMA的阳性细胞百分率(63.1±3.6％)、平均OD值(0.38±0.02)与Sham组(21.3±4.3％、0.30±0.01)比较，显著性增加(P＜0.01)。AG+TGF-β1组与TGF-β1组相比，α-SMA阳性细胞百分率(58.3±4.5％)、平均OD值(0.35±0.01)均显著性降低(P＜0.05)；而与Sham组相比，仍然较高(P＜0.01)。AG组α-SMA阳性细胞百分率(22.7±4.5％)、平均OD值(0.30±0.01)与Sham组相比，均无统计学意义(P＞0.05)。以上免疫细胞化学结果综合分析：AG单独作用不影响成纤维细胞表达CTGF、α-SMA，但是AG能够减弱TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF、α-SMA的作用。 4.流式细胞仪检测肺成纤维细胞表达α-SMA(以均道值表示)。Sham组均道值为516±5.6，TGF-β1组均道值(580±13.0)明显高于Sham组(P＜0.01)。AG+TGF-β1组均道值(544±10.6)与Sham组相比，呈显著性增加(P＜0.05)；与TGF-β1组相比，呈显著性降低(P＜0.05)。AG组(526±19.3)与Sham组相比，无显著性差异(P＞0.05)。 研究结论： 1.TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF；促进肺成纤维细胞向MF的分化。 2.AG减少TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF；抑制肺成纤维细胞向MF的分化。