稻米中镉快速检测金标试纸条的研制

来源 :长沙理工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wangxin3163
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
65%的中国人以稻米为绝对主食,2002年,农业部稻米及制品质量监督检验测试中心曾对全国市场稻米进行安全性抽检,结果显示,稻米中镉超标率为10.3%。未来中国农产品安全问题中,镉等重金属污染将取代农药,成为事故多发地带。传统的检测方法已不能满足需求,急需找到快速、灵敏、高效的新型检测方法,本论文以稻米中重金属镉为研究对象,以制备单克隆抗体为基础,进一步组装金标试纸条,以期建立现场、快速镉的免疫检测方法。采用大分子双功能螯合剂1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(isothiocyano benzy-EDTA, iEDTA)螯合重金属镉离子形成六齿配合物,再分别偶联载体OVA和BSA,合成人工免疫抗原Cd-iEDTA-OVA和检测抗原Cd-iEDTA-BSA。石墨炉原子吸收分光光度计测得Cd-iEDTA-OVA和Cd-iEDTA-BSA中镉含量分别为174.6230μg-L-1和48.1881μg·L-1;紫外分光光度扫描结果表明完全抗原同时具备载体蛋白与半抗原的吸收特性,并测得OVA和BSA含量分别为1.7892mg-mL-/1和1.8065mg·mL-1,结果说明镉完全抗原合成成功,可用于后续试验研究。采用Cd-iEDTA-OVA多点少量注射BALB/c小鼠,获得抗血清,通过细胞融合、杂交瘤及克隆技术获得7F4和7E8两株特异性较好的杂交瘤细胞;通过体内诱生腹水法及辛酸-硫酸铵盐析、差量离心法纯化技术,获得7E8E5、7E8G9、7F488、7F4D6和7F4H85株单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)结果表明,5株单抗均属IgGl型;亲和力均高,数量级达108;仅与Hg2+有较强交叉,与其他离子几乎无交叉;初步建立了Cd2+间接竞争ELISA法,最低检测限为260ng·mL-1,在260~5000ng·mL-1范围内趋近直线。SDS-PAGE法结果显示有且只有两条清晰的区带(重链带和轻链带),说明单抗纯度高。其中7E8E5和7E8G9效价相对高,分别达1:512000和256000,亲和常数也最高,分别为4.55×1081·mmoL-1和2.20×1081·moL-1,因此可从该两株单抗择优制备金标试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备13nm金颗粒,通过目测、可见-紫外分光光度法、透射电镜法鉴定,结果表明金溶液稳定于酒红色,且呈球形、大小均一,可用于标记7E8G9。通过条件优化得到:最佳标记pH为8.2,最小抗体用量为每1mL胶体金溶液中6.0μg单抗,T线包被浓度为1.0mg·mL-1,C线包被浓度为1.5mg·mL-1,且包被条件为37℃条件下干燥60min,最佳金标抗体稀释度为0.75倍,最佳封闭温度及时间为25℃干燥60min,最佳离子浓度为O.Olmol·L-1。将完全抗原Cd-iEDTA-BSA作为T线,羊抗鼠二抗作为C线,包被于硝酸纤维素膜上,纳米金颗粒标记的7E8G9单克隆抗体包被于金标垫上,组装成定性检测金标试纸条。试纸条的灵敏度为0.2 mg·kg-1、重复性良好、与Hg2+有较强交叉,最高共存浓度不得高于1.0mg·kg-1;与Zn2+有一定交叉,最高共存浓度不得高于10 mg·kg-1;与Cu2+、Fe2+、Ca2+、Mg2+、Al3+、.Pb2+几乎无交叉;贮存期约为1年。试纸条检测稻米中镉与GFAAS结果基本一致。
其他文献
人造板的重要组成部分之一的中密度纤维板(MDF)来说,传统的间歇式热压机,无论是单层或多层的都愈来愈不能满足其生产发展的要求,流水线生产中断,原材料消耗率高,产品质量不高
方志敏、刘胡兰……每当重读这些英雄模范人物的先进事迹,心中便充满敬佩之情,获得一次精神洗礼;翻雪山、过草地、战日寇……每当重温我们党过去的峥嵘岁月,便深感胜利的来之不易
报纸
电力线载波通信作为电力系统特有而不可或缺的通信手段,是电力系统经济调度和稳定可靠运行的保证。随着电力系统对通信质量的要求不断提高和其他通信技术的竞争,传统的模拟设
自20世纪90年代以来,虚拟现实技术由于其独有的多感知性、沉浸感、交互性及自主性一直是信息领域研究、开发和应用的热点方向之一。它借助计算机构建出一个与现实环境十分逼
<正>美国学前教育者拉瓦特里说:"教师在最为适当的时候提出适当的问题,这样就有可能推动儿童在较高的水平上进行活动。"幼儿教师的提问是教师引导幼儿主动探索的重要教学手段
目的对白癜风患者的生活质量进行调查并做结果分析。方法采用SF-36健康调查量表对140例白癜风患者进行问卷调查分析。结果SF-36测评结果显示:白癜风患者和正常人群在精神健康
根治性子宫切除术(radical hysterectomy,RH)是治疗早期宫颈癌的标准术式,一百多年前由Wertheim提出,19世纪50年代Meigs将其改良并得到普及,术后5年生存率达80%~90%。但是,传
乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因之一,严重威胁人类的健康。作为一种非细胞毒性嗜肝病毒,HBV可在肝细胞内复制,病毒本身并不造成肝细胞的破坏,
肉类宰后成熟过程是一个多种蛋白质和酶类参与的过程,对于肉类食用品质改善有着十分重要的作用。肌肉组织中富含促氧化因子,因此在肉的宰后成熟、贮藏和加工过程中普遍存在氧
自建国以来,我国政府职能重心发生了一系列变化,由政治职能为重心转变为经济职能为重心,又转变为社会管理、公共服务为重心。这些职能重心的转变主要是受我国社会主义民主政治建