【摘 要】
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研究背景先天性巨结肠(Hirschsprungdisease,HSCR)是一种新生儿时期常见的消化道发育畸形。主要发病机制是在胚胎期的肠神经嵴细胞(entericneuralcrestcell,ENCC)迁移、存活和分化发生异常,导致受影响肠段的持续异常收缩,近端的结肠代偿性扩张和增厚,最终表现为生后患儿胎粪排泄延迟、并出现顽固性腹胀和便秘。先天性巨结肠给患儿的健康
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研究背景先天性巨结肠(Hirschsprungdisease,HSCR)是一种新生儿时期常见的消化道发育畸形。主要发病机制是在胚胎期的肠神经嵴细胞(entericneuralcrestcell,ENCC)迁移、存活和分化发生异常,导致受影响肠段的持续异常收缩,近端的结肠代偿性扩张和增厚,最终表现为生后患儿胎粪排泄延迟、并出现顽固性腹胀和便秘。先天性巨结肠给患儿的健康造成了危害,而且严重者可以威胁患儿的生命。所以迫切需要进一步研究HSCR的发病机制,以便尽早进行干预以改善疾病的预后。目前对于先天性巨结肠的研究焦点主要集中在影响肠神经发育的各种调控机制的研究上。在肠壁内ENCC迁移分化并形成肠神经系统(entericnervoussystem,ENS)的过程是受多种因素调节的非常复杂的过程,除了受自身的基因及调控因子的精确调节,还受到周围微环境的影响。巨噬细胞是构成肠道微环境中的重要组成成分。研究显示肠道中肌层巨噬细胞(muscularismacrophage,MM)与肌间神经丛密切相关,MM与肠神经细胞之间存在明显的交互对话甚至发育性相互依存关系,而且肌层巨噬细胞显示组织保护表型,表达M2型巨噬细胞的相关基因。因此MM是否与先天性巨结肠的发病相关值得我们研究。目的探讨先天性巨结肠中病变肠段中MM的分布及数量以及MM是否通过影响肠神经系统的发育参与先天性巨结肠的发病。方法选取山东省立医院2018年8月至2021年1月收治的年龄小于6月的14例先天性巨结肠患儿的手术切除标本的小部分组织,分为无神经节细胞的狭窄段和有神经节细胞的扩张段。所有病例均经术后病理确诊。标本进行石蜡切片后行免疫组化染色,检测标本中具有M2型巨噬细胞表型的肌层巨噬细胞(CD163)的在肠壁中分布及数量差异。然后用诱导后的人单核白血病细胞系(THP-1)作为M0型巨噬细胞,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)继续极化诱导M0型巨噬细胞为M1型巨噬细胞,用白介素4(interleukin-4,IL-4)与白介素13(interleukin-13,IL-13)继续极化诱导M0型巨噬细胞为M2型巨噬细胞,将M2和M1型巨噬细胞分别与神经干细胞(SH-SY5Y细胞系)共培养,或用M2和M1型巨噬细胞的条件培养基处理SH-SY5Y细胞,采用CellCountingKit-8试剂盒、流式细胞术、溴乙啶/吖啶橙荧光双染、细胞迁移实验方法检测共培养中M2型巨噬细胞对神经干细胞的增殖、凋亡、死亡和迁移的影响。结果免疫组化结果显示在HSCR扩张段肠段中,CD163阳性的肌层巨噬细胞主要位于肠壁肌间神经节细胞周围,内层环形肌中也有少量散在分布,而在HSCR狭窄段肠段中,肌间及肌层内的CD163阳性的肌层巨噬细胞明显减少。CD163阳性的肌层巨噬细胞的细胞计数在两组间具有统计学差异(t=8.288,P
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