疯草内生真菌（U.oxytropis）是由分布于我国西北地区的疯草中分离得到的一类内生真菌,其代谢产物苦马豆素（Swainsonine,SW）一方面具有良好的抗肿瘤活性,另一方面能导致牛羊疯草中毒,对草原畜牧业造成了严重的危害。因此U.oxytropis中SW生物合成机制的阐明可以为后续生物发酵大量获得SW用以抗肿瘤机制研究与临床应用和疯草脱毒奠定基础。有研究表明U.oxytropis与疯草之中SW的含量有密切的关系,但U.oxytropis的生物合成SW机理尚不明确,本研究拟通过对U.oxytropis诱变筛选,利用高通量测序方法,对比分析诱变菌株与U.oxytropis的基因差异,在分子水平上为SW生物合成机理进行初步探索研究。主要有以下几个方面内容:1.选取相同数量的U.oxytropis菌株进行发酵培养,每间隔4 d取出一组,共记录8组,测定菌株生长32 d的情况,记录不同生长周期U.oxytropis菌丝含量的变化,绘制U.oxytropis的生长曲线,通过对菌丝及发酵液中SW的提取,预先经过薄层做初步定性试验,气相检测做定性试验,酶联反应检测计算SW的含量,确定U.oxytropis的生长周期,结果表明该菌株在生长24 d菌丝产量及SW含量最高。2.利用物理化学诱变的手段对U.oxytropis进行诱变筛选。以U.oxytropis为出发菌株,利用紫外线、亚硝基胍、紫外+亚硝基胍为条件诱变U.oxytropis,测定不同诱变条件对菌株的致死率,选择最佳的诱变条件并通过发酵培养检测SW含量,选择SW含量变化较大的目标菌株,结果表明,经诱变处理后的突变菌株SW产量均有所变化,生长形态与原始菌株也有轻微的变化,但部分菌株传代后不稳定,通过诱变筛选得到两株SW产量变化较大,分别为UD1突变菌株SW产量增加21.87%、D4突变菌株SW产量降低23.35%。3.通过高通量测序平台（Lon PGM）对原始菌株和SW产量变化较大的D4突变株做了高通量测序分析。首先对U.oxytropis、D4突变株进行DNA的提取,利用贝克曼磁珠C1磁珠核酸纯化试剂对所提取的DNA进行纯化、Thermo Scientific公司的试剂盒进行基因文库的构建、荧光定量PCR进行文库定量计算、经过高通量二代测序、测序结果拼接等,获得原始菌株和突变株D4全基因组序列,通过BLAST、GO分析软件,注释到U.oxytropis生物合成SW的关键基因SwnK、SwH2、SwH1、SwnR、putative amino acid transporter和关键酶pyrroline-5-carboxylate reductase、5’-piperidenine-6-L-carboxylate、Formate/glycerate dehydrogenase catalytic、saccharopine reductase-like protein,并结合KEGG通路数据库对U.oxytropis生物合成SW通路进行了预测,这为U.oxytropis生物合成机制的探明提供了理论研究基础。